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      細(xì)胞培養(yǎng)過程中的常見問題

      根據(jù)傳統(tǒng)定義,自組織第一次收獲和接種的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞 [Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細(xì)胞直接從組織分離,生命周期有限,經(jīng)數(shù)次傳代后會逐漸停止生長。原代細(xì)胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞的最大生長空間,以保持細(xì)胞群中基因型和表型的一致性。細(xì)胞系是不斷生長、分化的細(xì)胞群,因其經(jīng)過遺傳改造,致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細(xì)胞系用于醫(yī)療或科研。

      倍增和代數(shù)有什么區(qū)別?
      倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)的翻倍,通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出,傳代培養(yǎng)過程的次數(shù),傳代培養(yǎng)的目的,是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長。

      接收到的凍存細(xì)胞該如何處理?
      收到包裝箱后,立即將凍存細(xì)胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快,以避免升溫。不要將細(xì)胞儲存在-80℃,這樣會對細(xì)胞造成不可挽回的傷害。

      凍存的細(xì)胞該如何開始培養(yǎng)?
      (1) 將一管細(xì)胞從液氮罐中取出,注意保護(hù)手和眼睛。
      (2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中,輕輕握住并旋轉(zhuǎn),直到管內(nèi)物體完全融化。
      (3) 將凍存管立即從水浴中拿出,擦干,轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。
      (4) 用70%的酒精沖洗凍存管,然后擦去多余酒精。
      (5) 打開蓋子,注意手指不要碰到里面的螺紋(注意,由于凍存管有負(fù)壓,開蓋時可能會有少量溢出,這是正常現(xiàn)象)。
      (6) 用多聚賴氨酸(或參照說明書)包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細(xì)胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細(xì)胞。
      (7) 蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子,輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開蓋子。
      (8) 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中(37℃,5%CO2,95%空氣)
      (9) 放入培養(yǎng)箱后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基,以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞。

      細(xì)胞培養(yǎng)過程中,多久更換一次培養(yǎng)基?
      這取決于細(xì)胞生長的速度。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基,許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一,周三,周五更換培養(yǎng)基。

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