細(xì)胞收到后，顯微鏡下觀察，有些細(xì)胞貼壁比較牢，它不會因?yàn)檫\(yùn)輸問題有變化，收到后下顯微鏡下觀察細(xì)胞的密度，確定無污染，細(xì)胞無異常先放培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2個小時后，按照貼壁細(xì)胞消化順序消化：

一、貼壁細(xì)胞消化順序如下：
1.準(zhǔn)備工作，胰酶、培養(yǎng)基、PBS各預(yù)熱10-15分鐘
1. 去上清，先用PBS清洗兩次
2.棄PBS后，加入1ml胰酶，前后左右輕輕搖勻后，超凈臺常溫放置3-5分鐘左右
3.顯微鏡下觀察細(xì)胞，若細(xì)胞變得橢圓透亮后，輕拍細(xì)胞瓶壁
4.顯微鏡下觀察細(xì)胞是否已經(jīng)脫落，要是沒有脫落繼續(xù)消化2分鐘后再輕輕拍打，95%以上細(xì)胞脫落請立即加入含有血清的培養(yǎng)基終止消化
5.將消化下來的細(xì)胞懸液移入離心管離心，正常離心轉(zhuǎn)速：1000-1200轉(zhuǎn)，5分鐘
6.分瓶，首次傳代建議1：2傳，或者傳代一瓶，凍存一支

二、懸浮細(xì)胞傳代規(guī)則：
1，收到細(xì)胞后穩(wěn)定一小時后，分兩個50ml的離心管對等離心1000轉(zhuǎn)5分鐘
2.棄上清，一管分2個T25瓶傳代，一管凍存

懸浮細(xì)胞傳代不需要每次都離心操作，建議每傳代2次離心操作一次，以去除細(xì)胞中的碎片

三、半懸浮半貼壁細(xì)胞消化要領(lǐng)：
1.收到細(xì)胞穩(wěn)定一小時后，懸浮細(xì)胞收集離心，貼壁細(xì)胞按照貼壁順序來消化即可
2.需要注意的是再次凍存的過程可能導(dǎo)致細(xì)胞生長性能的改變。

四、培養(yǎng)瓶中應(yīng)該加入多少體積的培養(yǎng)基?
我們推薦的用量為：T-25培養(yǎng)瓶5ml，T-75培養(yǎng)瓶15ml，T-150培養(yǎng)瓶30ml。