所有的細(xì)胞培養(yǎng)伙伴都知道細(xì)胞必須進(jìn)行傳代培養(yǎng)，因?yàn)榧?xì)胞的數(shù)量隨著培養(yǎng)過程之中的不斷繁殖而增加。然而，培養(yǎng)皿培養(yǎng)瓶的空間有限，增殖受到抑制。因此，必須將一些細(xì)胞移到其他培養(yǎng)皿/瓶之中，以便為細(xì)胞留出足夠的生長空間細(xì)胞傳代不僅是為了為細(xì)胞建立一個(gè)更大的“家”，也是為了進(jìn)一步增殖細(xì)胞系或細(xì)胞系。這樣，我們就可以有足夠的細(xì)胞用以做各種實(shí)驗(yàn)。然而，許多伙伴無法很好地掌握傳代時(shí)間，因?yàn)榕袛嗍欠耖_始傳代的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于不同的細(xì)胞略有不同。今天我們主要講細(xì)胞傳代的時(shí)間。

細(xì)胞傳代的時(shí)間？
對(duì)于貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)，傳代的必要性取決于下列兩個(gè)方面：

細(xì)胞密度：
當(dāng)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期，未達(dá)到融合狀態(tài)時(shí)，應(yīng)進(jìn)行傳代培養(yǎng)。當(dāng)正常細(xì)胞達(dá)到融合狀態(tài)時(shí)，它們將停止生長（接觸抑制），并且在重新接種之后需要很長時(shí)間才能恢復(fù)，轉(zhuǎn)化細(xì)胞即使在達(dá)到融合狀態(tài)時(shí)也可以繼續(xù)增殖，但它們通常在大約加倍兩次之后惡化。類似地，懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞也應(yīng)在進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期且未達(dá)到融合狀態(tài)時(shí)進(jìn)行傳代培養(yǎng)。當(dāng)達(dá)到匯合狀態(tài)時(shí)，懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞聚集成團(tuán)，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶時(shí)培養(yǎng)基變得渾濁

培養(yǎng)基耗盡：
生長培養(yǎng)基pH值的降低通常表明細(xì)胞代謝的副產(chǎn)物乳酸的積累。乳酸具有細(xì)胞毒性，pH值的降低也是細(xì)胞生長的不利因素。pH值變化的速度通常取決于培養(yǎng)系統(tǒng)之中的細(xì)胞濃度。細(xì)胞濃度越高，培養(yǎng)基消耗越快如果pH值迅速降低（&gt；0.1–0.2 pH單位）且細(xì)胞濃度增加，則應(yīng)傳代細(xì)胞

細(xì)胞傳代時(shí)間表？
注意，細(xì)胞傳代必須嚴(yán)格按照預(yù)定時(shí)間進(jìn)行，為了確保細(xì)胞生物學(xué)行為的穩(wěn)定性并便于監(jiān)測(cè)其健康狀態(tài)
有必要從一定的接種密度逐漸調(diào)整細(xì)胞接種密度，直到達(dá)到適合細(xì)胞的穩(wěn)定生長速率和產(chǎn)量。細(xì)胞偏離如此確定的生長模式通常表明細(xì)胞健康狀況不佳（例如退化、污染）或培養(yǎng)系統(tǒng)的某個(gè)組件功能異常（例如未達(dá)到最佳溫度且培養(yǎng)基太舊）強(qiáng)烈建議您保存詳細(xì)的細(xì)胞培養(yǎng)記錄，包括飼養(yǎng)和傳代時(shí)間、使用的培養(yǎng)基類型、分離方法、種子分離率、形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果、接種濃度、產(chǎn)量和抗生素使用最好根據(jù)傳代時(shí)間表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)和其他非常規(guī)操作（如改變培養(yǎng)基類型）。如果你的實(shí)驗(yàn)時(shí)間表與傳統(tǒng)的通道時(shí)間表不一致，當(dāng)細(xì)胞仍處于延遲期或已達(dá)到融合狀態(tài)并停止生長時(shí)，應(yīng)確保細(xì)胞未傳代

貼壁細(xì)胞傳代過程：
下列實(shí)驗(yàn)方案介紹了貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞傳代的一般過程。當(dāng)通過您使用的細(xì)胞系時(shí)，建議您嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)之中所有產(chǎn)品附帶的操作說明。偏離某個(gè)細(xì)胞所需的培養(yǎng)條件會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞表型異常，甚至完全培養(yǎng)失敗.
（1）傳代后的準(zhǔn)備
器具紫外線照射消毒（30min）：無菌培養(yǎng)瓶、15ml離心管、移液管、，移液槍和槍頭倒置顯微鏡之下觀察細(xì)胞形態(tài)，確定細(xì)胞是否需要傳代及稀釋倍數(shù)
（2）胰蛋白酶EDTA消化
從培養(yǎng)箱之中取出傳代細(xì)胞（蓋緊蓋子），用75%酒精消毒瓶口，吸取培養(yǎng)細(xì)胞的舊培養(yǎng)基，用PBS緩沖液沖洗掉剩余的舊培養(yǎng)基，按25m2ml消化液的比例加入消化液。消化液之中的EDTA濃度取決于不同的細(xì)胞。放入顯微鏡之下觀察。待細(xì)胞全部變圓之后，立即放入超凈臺(tái)，加入6ml細(xì)胞完整培養(yǎng)基停止消化，消化時(shí)間1-5min。它是特定于細(xì)胞的。用無菌吸管輕輕吹掃細(xì)胞表面。注意吹掃所有培養(yǎng)物表面。你可以先左右吹氣，然后兩邊吹氣，取出所有細(xì)胞懸液，以1000轉(zhuǎn)分的速度放入一個(gè)干凈的15ml離心管之中5分鐘
（3）制備細(xì)胞懸液并培養(yǎng)
吸收上清液并丟棄。不要吸收頂部的細(xì)胞沉淀。向離心管之中的細(xì)胞沉淀之中加入適量的完整培養(yǎng)基，吹掃并混合均勻。吹制過程之中盡量不要產(chǎn)生氣泡，按1:2的比例將瓶子分開
（4）結(jié)果觀察
第二天觀察細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)液更換時(shí)間一般為2-3天。
5）注意事項(xiàng)
1嚴(yán)格無菌
2適度消化：掌握消化液的最佳濃度
3輕輕吹打細(xì)胞

懸浮細(xì)胞傳代過程？
懸浮細(xì)胞傳代更容易。您可以直接吸出培養(yǎng)瓶之中的液體，只留下少量，然后添加新鮮培養(yǎng)液。當(dāng)細(xì)胞懸液之中有很多碎片或顆粒，你感覺臟了，你可以將懸浮液移入離心管，以1000-1500 rpm離心3分鐘，丟棄上清液，加入約2 ml培養(yǎng)基，均勻吹掃，在裝有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶之中加入2-3滴，然后把它放在二氧化碳培養(yǎng)箱之中培養(yǎng)

讀完下面的內(nèi)容，你學(xué)會(huì)了嗎？細(xì)胞傳代是一項(xiàng)技術(shù)工作，需要不斷積累經(jīng)驗(yàn)。除了把握時(shí)間之外，還有很多方面需要注意。