一、細胞簡介

細胞簡介

該細胞來源于大鼠的正常皮膚組織。

角質(zhì)形成細胞是一種不斷分化的復(fù)層鱗狀上皮細胞，其分化的最終階是形成角蛋白。根據(jù)角質(zhì)形成細胞的發(fā)展階段和特點，從內(nèi)向外可將其分為五層。基底細胞層又稱生發(fā)層，棘細胞層，顆粒層，透明層，角質(zhì)層。

角質(zhì)形成細胞的分化成熟表現(xiàn)為從基底層到向角質(zhì)層的逐漸移行。在單一移行過程中，角質(zhì)形成;細胞的形狀和功能也逐漸發(fā)生著變化，從單層柱狀上皮的基底層到扁平的細胞核消失的角質(zhì)層。新生的基底細胞進入棘細胞層，然后上移到顆粒層的最上層。

細胞名稱

大鼠原代角質(zhì)形成細胞

細胞別稱

Primary rat keratinocyte cells

細胞貨號

Delf-10947

來源

大鼠；正常皮膚

細胞形態(tài)

上皮樣細胞

生長特性

貼壁生長

細胞鑒定

廣譜角蛋白((Pan Cytokeratin)免疫熒光染色為陽性。

培養(yǎng)條件

推薦使用大鼠原代角質(zhì)形成細胞專用培養(yǎng)基（貨號：Delf-26423）來培養(yǎng)該細胞。

名稱

體積

濃度

保存條件

大鼠原代角質(zhì)形成細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基

490mL

1×

4℃、避光

大鼠原代角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)添加劑

5mL

100×

-20℃、避光

雙抗（青霉素/鏈霉素，P/S）

5ml

100×

-20℃、避光

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4ml常規(guī)培養(yǎng)基（含10%FBS）的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞；
4、將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的T25培養(yǎng)瓶（或6cm皿）中37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)；

三、細胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法

1、盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2、用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1次，吸走潤洗的PBS；
3、加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化2min左右（不同胰酶，消化時間不同，要根據(jù)細胞脫落情況，在進行終止消化）；
5、輕輕側(cè)拍T25培養(yǎng)瓶鏡下觀察，消化到細胞脫落在胰酶當(dāng)中后，加入2-3ml含10%FBS的常規(guī)培養(yǎng)基終止消化；
6、1000rpm離心5min，收集到15ml離心管中加2ml該細胞完全培養(yǎng)基，重懸細胞時，在離心管中輕輕吹打，把細胞混勻；
7、按1:2分配到新的T25培養(yǎng)瓶中，添加4-5ml完全培養(yǎng)基放回37℃培養(yǎng)箱；

注意事項

不同品牌胰酶消化時間差別較大，可根據(jù)細胞形態(tài)判斷消化進程

四、細胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配（推薦使用原代細胞無血清凍存液Delf-11614進行凍存細胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細胞，計數(shù)，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml（本公司是1個T25培養(yǎng)瓶長滿凍存1支凍存管）；
2、將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3、將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

細胞培養(yǎng)清除試劑