一、細胞簡介

細胞簡介

細胞表達相對大量的c-myc mRNA，但c-myc DNA序列不擴增。表達c-myb, v-fms, Ha-ras, Ki-ras, N-ras, c-raf 1 mRNAs。該細胞高表達四種生化標記物：神經元特異性烯醇酶(neuron specific enolase)、肌酸激酶的腦同工酶(brain isoenzyme of creatine kinase)、L-DOPA脫羧酶(L-DOPA decarboxylase)和類蛙皮素免疫活性(bombesin-like immunoreactivity)。

STR鑒定結果為：Amelogenin: X, X；CSF1PO: 11,12；D13S317: 11,12；D16S539: 11,11；D5S818: 12,12；D7S820: 9,10；TH01: 6,9.3；TPOX: 8,11；vWA: 14,16。

細胞名稱

NCI-H146 人小細胞肺癌細胞

細胞貨號

Delf-17051

來源

59歲；男性；骨髓轉移灶

細胞形態(tài)

多細胞聚團

細胞類型

腫瘤細胞

生長特性

懸浮生長

培養(yǎng)條件

1640培養(yǎng)基+87%；優(yōu)質胎牛血清+10%；GlutaMAX-1谷氨酰胺+1%；Sodium Pyruvate丙酮酸鈉 +1%；雙抗+1%；

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細胞復蘇方法

復蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞；
4、將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細胞傳代方法（懸浮細胞）

傳代比例

1:2（不同細胞情況具體對待）

傳代方法

1、當細胞量達到 8-10×10⁵cell/ml 時，可進行傳代；

2、在生物安全柜內，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內的細胞懸液至離心管中；

3、1000rpm 離心 5min，離心完成后，棄上清；

4、準備兩個新的T-25 培養(yǎng)瓶。向細胞沉淀加入完全培養(yǎng)基重懸，調整細胞密度為2-4×10⁵cell/ml，均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶中，每瓶約6-8ml；

5、水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO₂ 培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

注意事項

注意收集懸浮的細胞

四、細胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

凍存規(guī)格

建議每瓶T25瓶凍存1支。

凍存方法

1、待細胞生長狀態(tài)良好時，即可進行細胞凍存；

2、收集細胞懸液，計數；

3、1000rpm 離心 5min，離心完成后，棄上清；

4、加入細胞凍存液重懸細胞沉淀，調整細胞密度為2×10⁶ cell/ml，輕輕混勻后，將細胞懸液加入凍存管，1ml/支。

5、將凍存管轉入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉入-80℃冰箱中過夜降溫；

6、次日取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉入液氮罐中保存；

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產品僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用。