產(chǎn)品名稱

中文名稱：人外周血 CD19+ B 細(xì)胞

英文名稱：Human Peripheral Blood CD19+ B Cells

規(guī)格：10M

預(yù)期用途：可作為多種領(lǐng)域研究所需的原材料。

貯藏條件與有效期

置于液氮保存，有效期為 24 個(gè)月；

生產(chǎn)日期，有效期至：見標(biāo)簽。

產(chǎn)品簡介

CD19 分子是細(xì)胞表面糖蛋白，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，參與調(diào)節(jié) B 細(xì)胞發(fā)育、活化和增殖。與 CD21、 CD81 組成一個(gè)大的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，表達(dá)在 B 細(xì)胞及其前體上，是 B 細(xì)胞系列特異性抗原中最早表達(dá)的標(biāo)記。CD19 正常表達(dá)見于 B 淋巴細(xì)胞；濾泡樹突狀細(xì)胞；正常漿細(xì)胞及其前體。異常表達(dá)見于大多數(shù)急性 B 淋巴細(xì)胞白血病/淋巴瘤，但在骨髓瘤細(xì)胞，T 細(xì)胞和正常的粒細(xì)胞上無表達(dá)。美森細(xì)胞利用自有的 Flosep-C 細(xì)胞分離純化技術(shù)從外周血中純化出 CD19+B 細(xì)胞，經(jīng)流式檢測(cè)，其純度大于 90%，純化后置于液氮保存。

【操作步驟】

所需試劑：

1 、IMDM，α-MEM 或 RPMI-1640

2 、FBS

3 、DNase I

操作流程：

1、 準(zhǔn)備好 37°C 水浴，將 RPMI-1640 與 FBS 溫浴至 37°C；

2 、生物安全柜中，配制含 10% FBS 的培養(yǎng)基（IMDM, α-MEM 或 RPMI-1640 均可），待用；

3 、從液氮中取出 CD19+B 細(xì)胞凍存管，置于-80°C 超低溫冰箱中數(shù)分鐘，使凍存管中的液氮揮發(fā)，而后迅速將其置于 37°C 溫水中，并快速水平晃動(dòng)，使其內(nèi)含物盡快融化，直至凍存管固體內(nèi)含物余下一小冰屑后取出凍存管；

注意：

1）從液氮中取出凍存管時(shí)，往往在凍存管里含有液氮，最好先將凍存管先置于超低溫冰箱中， 使液氮揮發(fā)，再進(jìn)行水浴化凍的操作；

2）盡可能將凍存管的內(nèi)含物全部浸沒于 37°C 溫水中，使內(nèi)含物均勻融化；

3) 請(qǐng)勿使溫水沒過凍存管蓋的螺口，以防污染；

4) 細(xì)胞復(fù)蘇的操作過程要迅速，避免影響細(xì)胞復(fù)蘇后的活性。

5) 采用正選（Positive selection）方法分離的細(xì)胞因細(xì)胞表面標(biāo)記有磁珠，故可能凍存管中細(xì)胞

顏色較深，此為正常現(xiàn)象，不影響后續(xù)復(fù)蘇和使用。

4 在將凍存管拿進(jìn)生物安全柜之前，用 75%酒精對(duì)其表面進(jìn)行消毒；

5 輕輕重懸細(xì)胞，并將其移入裝有 100μg DNase I 的 50mL 離心管里；

注意：

1）加入 DNase I 可有效減少細(xì)胞復(fù)蘇后細(xì)胞團(tuán)塊的產(chǎn)生；

2）DNase I 的使用是非必須的，對(duì)于 DNA, RNA 等的提取目的可不使用。

6 用 1mL 培養(yǎng)基沖洗凍存管，并將此懸液以 3-5s 每滴的速度滴加到 50mL 離心管中，并且同時(shí)輕輕搖晃離心管，使滴加的懸液混勻；

7 吸取 15-20mL 的培養(yǎng)基以 3-5s 每滴的速度滴加到 50mL 離心管中，并且同時(shí)輕輕搖晃離心管，使滴加的懸液混勻；

注意：第 5,6,7 步驟可使細(xì)胞中的 DMSO 緩慢均勻的滲透出來，最大程度保證細(xì)胞安全，但操作較為緩慢，若有多個(gè)樣品需要處理時(shí)，可以將操作步驟更改為：

5’：輕輕重懸細(xì)胞，并將其移入裝有 100μg DNase I 的 15mL 離心管里；

6’：用 1mL 培養(yǎng)基沖洗凍存管，并將此懸液合并到到 15mL 離心管里；

7’：吸取 10mL 培養(yǎng)基，直接加入到 15mL 離心管中，反復(fù)輕柔吹打或上下顛倒混勻，室溫孵育 10min；

8 室溫下，300g 離心 10min；

9 迅速使用移液槍吸走上清，剩余少許液體，并輕輕吹打液體使細(xì)胞懸浮；

注意：

1）離心結(jié)束后，盡快吸走上清；

2) 吹打液體時(shí)動(dòng)作要輕，避免損傷細(xì)胞，并且吹打時(shí)盡可能避免氣泡產(chǎn)生。

10 緩慢加入 15-20mL 新鮮培養(yǎng)基（快速法中則只要在 15mL 離心管中加入 10mL 培養(yǎng)基即可），并同時(shí)輕輕搖晃離心管；

11 室溫下，300g 離心 10min；

注意：采用正選（Positive selection）方法分離的細(xì)胞因細(xì)胞表面標(biāo)記有磁珠，故離心后管中細(xì)胞沉淀顏色較深，此為正常現(xiàn)象，不影響后續(xù)使用。

12 迅速使用移液槍吸走上清，剩余少許液體，并輕輕吹打液體使細(xì)胞懸浮，此 CD19+B 細(xì)胞即可用于下游實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品性能指標(biāo)

產(chǎn)品性能符合本企業(yè)制定的產(chǎn)品技術(shù)要求。