產(chǎn)品描述

種屬: 人源（Homo sapiens）

組織來(lái)源: 結(jié)腸（Colon）

疾病: 健康（Healthy）

年齡: 54 歲（54 years）

性別: 男（Male）

細(xì)胞類型: 上皮細(xì)胞（Epithelial）

生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)（Adherent）

拆包 & 存儲(chǔ)

1. 請(qǐng)立即檢查包裝袋是否有破損或漏液

2. 請(qǐng)立即將細(xì)胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進(jìn)行培養(yǎng)傳代

注意：如為凍存管，請(qǐng)收到后立即解凍培養(yǎng)。若來(lái)不及解凍，請(qǐng)儲(chǔ)存于液氮中（存儲(chǔ)于負(fù)80度，會(huì)降低細(xì)胞存活率）

培養(yǎng)瓶中細(xì)胞操作步驟

對(duì)于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，寄送前，我們會(huì)將培養(yǎng)基充滿整個(gè)培養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中貼壁細(xì)胞的脫落。

1. 收到細(xì)胞產(chǎn)品后，請(qǐng)注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細(xì)檢查是否渾濁、是否細(xì)菌污染。因在運(yùn)輸過(guò)程中存在顛簸，且有些細(xì)胞對(duì)溫度變化也很敏感，可能存在一些細(xì)胞脫落漂浮的情況，這些細(xì)胞仍是活細(xì)胞，請(qǐng)勿丟棄，可離心富集后傳代使用。

2. 對(duì)于貼壁的細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中的多余培養(yǎng)基，至剩余5-8mL左右，隨后將細(xì)胞置于含有5%CO?的37℃恒溫 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，擰松瓶蓋。如果細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶請(qǐng)立即傳代。

3. 對(duì)于懸浮的細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞至離心管中，離心200×g / 5 - 10 min，去除上清后，用5 mL培養(yǎng)基吹散細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，隨后置于含有5%CO?的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

凍存管細(xì)胞操作步驟

注意：為保存細(xì)胞的高存活率，請(qǐng)收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。

1.將凍存管置于37℃ 水浴中來(lái)回晃動(dòng)，迅速解凍。為避免污染， 確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約2分鐘。

2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開(kāi)始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。

3.將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中， 離心200×g / 5 - 10 min，用真空泵去除含有凍存液的上清。

4. 用完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細(xì)胞復(fù)蘇的存活率，請(qǐng)將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用。

5. 將細(xì)胞置于含有5%CO?的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)

1. 吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，加入PBS洗滌一次。

2. 加入 1.0 mL 0.05（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37 ℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細(xì)胞從壁上脫落分離。此過(guò)程大約需要2至3分鐘（此處為12.5 cm2 培養(yǎng)瓶所用體積，可根據(jù)實(shí)際情況增減用量）。

3. 加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞從培養(yǎng)瓶表面吹落，并使細(xì)胞分散。

4. 離心200x g/5 min，去除上清后，取適量的培養(yǎng)基將細(xì)胞重懸, 取適量懸液置于新的培養(yǎng)瓶中，并加入新鮮細(xì)胞完全培養(yǎng)基至總體積為4mL。

5. 將細(xì)胞置于含有5%CO?的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

傳代比例：建議 1:3 至 1:6（以培養(yǎng)瓶底面積計(jì)算）

培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天。

完全培養(yǎng)基配制

該細(xì)胞系培養(yǎng)所用基本培養(yǎng)基為 DMEM:M199=4:1,配置完全培養(yǎng)基時(shí)需加入2 % Cosmic Calf Serum,20 ng/ml hEGF,10 μg/ml Insulin,2 μg/ml Apo-Transferrin,5 nM Sodium-Selenite,1 μg/ml Hydrocortisone,10%FBS ，1%Anti-Anti

使用范圍

本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。