一、細(xì)胞簡(jiǎn)介

細(xì)胞簡(jiǎn)介

?Expi293F細(xì)胞是Expi293表達(dá)系統(tǒng)的核心組分，來(lái)源于人胚腎細(xì)胞293[HEK-293]細(xì)胞系，是293F細(xì)胞的一個(gè)亞克隆。Expi293F細(xì)胞保持懸浮培養(yǎng)，在Expi293表達(dá)培養(yǎng)基中可生長(zhǎng)直至達(dá)到高密度。? 相比適應(yīng)Expi293表達(dá)培養(yǎng)基的其他293細(xì)胞，Expi293F細(xì)胞表現(xiàn)出生長(zhǎng)更快且存活率更高的生長(zhǎng)特性，同時(shí)Expi293F細(xì)胞具有高度可轉(zhuǎn)染性，并且在瞬時(shí)蛋白表達(dá)中產(chǎn)生較高產(chǎn)量的外源蛋白質(zhì)得率?。?可廣泛適用于高產(chǎn)量表達(dá)的蛋白生產(chǎn)、重組抗體表達(dá)?、四環(huán)素誘導(dǎo)細(xì)胞?蛋白表達(dá)、工業(yè)化生物反應(yīng)器等應(yīng)用方向。

細(xì)胞名稱

Expi293F人胚腎細(xì)胞

細(xì)胞別稱

Expi293F

細(xì)胞貨號(hào)

Delf-17739

來(lái)源

人 女 胎兒，胚腎

細(xì)胞形態(tài)

上皮樣細(xì)胞

生長(zhǎng)特性

懸浮生長(zhǎng)

鑒定報(bào)告

提供STR鑒定

培養(yǎng)條件

推薦使用Expi293F細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基（貨號(hào)：Delf-28717）。

不需要另外添加血清等其他成分。為我公司研發(fā)改良產(chǎn)品。

注意：Expi293F細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)，傳代培養(yǎng)需在二氧化碳培養(yǎng)箱中用水平孵育搖床搖晃培養(yǎng)瓶（125mL搖瓶）水平震蕩培養(yǎng)，搖床速度為100-120 RPM。細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，注意及時(shí)換液傳代。復(fù)蘇后每隔24小時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，建議細(xì)胞濃度在2-3×10^6/ml時(shí)進(jìn)行傳代，傳代后濃度推薦為10^6/ml，凍存密度推薦為1-2×10^7/管。該細(xì)胞我公司只提供凍存管包裝發(fā)貨，發(fā)二管保其中一管。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細(xì)胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到4-6mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含10%FBS）的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
4、將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細(xì)胞傳代方法

傳代比例

傳代比例1: 2-1:3，傳代周期2-3天

傳代方法

1、當(dāng)細(xì)胞量達(dá)到8-10×10⁵cell/ml 時(shí)，可進(jìn)行傳代；

2、在生物安全柜內(nèi)，打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞懸液至離心管中；

3、1000rpm 離心 5min，離心完成后，棄上清；

4、準(zhǔn)備兩個(gè)新的T-25 培養(yǎng)瓶。向細(xì)胞沉淀加入完全培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細(xì)胞密度為2-4×10⁵cell/ml，均勻鋪于2個(gè)新的培養(yǎng)瓶中，每瓶約6-8ml；

5、水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于37℃，5%CO₂ 培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

注意事項(xiàng)

注意收集懸浮的細(xì)胞以及可能貼在瓶底的細(xì)胞

四、細(xì)胞凍存方法

凍存液配方

RPM1640培養(yǎng)液82%+10%FBS+DMSO 8% 現(xiàn)用現(xiàn)配。

凍存規(guī)格

建議每瓶T25瓶?jī)龃?支。

凍存方法

1、待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，即可進(jìn)行細(xì)胞凍存；

2、收集細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)；

3、1000rpm 離心 5min，離心完成后，棄上清；

4、加入細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞沉淀，調(diào)整細(xì)胞密度為2×10⁶cell/ml，輕輕混勻后，將細(xì)胞懸液加入凍存管，1ml/支。

5、將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過(guò)夜降溫；

6、次日取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存；

五、注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng)

1、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類(lèi)疾病的治療產(chǎn)品使用。

細(xì)胞培養(yǎng)清除試劑