種屬: 大鼠（Rattus norvegicus）

品系： Holtzman

組織來源: 腦（Brain）

疾病: 未知（Unknown）

年齡: 17天胚胎（17FD）

性別: 未知（Unknown）

細胞形態(tài)： 成纖維細胞（Fibroblast）

生長特性: 貼壁生長（Adherent）

拆包 & 存儲

1、請立即檢查包裝袋是否有破損或漏液

2、請立即將細胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進 行培養(yǎng)傳代

注意：如為凍存管，請收到后立即解凍培養(yǎng)。若來不及解凍，請儲存于液氮中（存儲于負80度，會降低細胞存活率）

培養(yǎng)瓶中細胞操作步驟

對于貼壁培養(yǎng)的細胞，寄送前，我們會將培養(yǎng)基充滿整個培養(yǎng)瓶，以減少產品運輸過程中貼壁細胞的脫落。

1、收到細胞產品后，請注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細檢查是否渾濁、是否細菌污染。因在運輸過程中存在顛簸，且有些細胞對溫度變化也很敏感，可能存在一些細胞脫落漂浮的情況，這些細胞仍是活細胞，請勿丟棄，可離心富集后傳代使用。

2、對于貼壁的細胞，在生物安全柜環(huán)境中，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中的多余培養(yǎng)基，至剩余5-8mL左右，隨后將細胞置于含有5%CO₂的34℃恒溫 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，擰松瓶蓋。如果細胞已經長滿培養(yǎng)瓶

請立即傳代。

3、對于懸浮的細胞，在生物安全柜環(huán)境中，轉移培養(yǎng)瓶中的細胞至離心管中，離心200×g / 5 - 10 min，去除上清后，用5 mL培養(yǎng)基吹散細胞，轉移至新的培養(yǎng)瓶中，隨后置于含有5% CO₂ 的34℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

凍存細胞操作步驟

注意：為保存細胞的高存活率，請收到產品后，立即解凍培養(yǎng)。

1、將凍存管置于34℃ 水浴中來回晃動，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約2分鐘。

2、 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。

3、將凍存管中的液體轉移到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中， 離心200×g / 5 - 10 min，用真空泵去除含有凍存液的上清。

凍存細胞操作步驟

1、用完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞并轉移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細胞復蘇的存活率，請將培養(yǎng)基在34℃水浴預熱后使用。

2、將細胞置于含有5%CO₂ 的34℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

貼壁細胞傳代培養(yǎng)

1、吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，加入PBS清洗一次。

2、加入 1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3至5分鐘（此處為12.5 cm2 培養(yǎng)瓶所用體積，可根據實際情況增減

用量）。

3、加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打將細胞從培養(yǎng)瓶表面吹落，并使細胞分散。

4、離心200x g/5 min，去除上清后，取適量的培養(yǎng)基將細胞重懸,取適量懸液置于新的培養(yǎng)瓶中，并加入新鮮細胞完全培養(yǎng)基至總體積為4mL。

5、將細胞置于含有5%CO2 的34℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。傳代比例：建議 1:2 至 1:3（以培養(yǎng)瓶底面積計算）。 培養(yǎng)基換液: 每隔 2至 3天。

注意：培養(yǎng)板需預先進行包被（包被液組分為： 0.015 mg/mL poly-l-lysine ）

培養(yǎng)板包被：

1、準備配置好上述包被液組分（4℃可放置1個月）。

2、向培養(yǎng)板中加入包被液，輕輕晃動至培養(yǎng)板底部全部覆蓋均勻（75cm2 底面積，需加入4.5mL 包被液）。

3、將培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱，孵育5 min。

4、將包被液吸走，待培養(yǎng)皿變干后使用。

細胞凍存液

細胞凍存液，請使用產品： Cryo Frozen Medium 離心收集細胞后，加入適量凍存液（每管細胞凍存量達到10的6次方），將凍存管放入凍存盒置于負80冰箱，24h后將凍存管轉入液氮長期保存。

完全培養(yǎng)基配制

該細胞系培養(yǎng)所用基本培養(yǎng)基為Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium(DMEM), 配置完全培養(yǎng)基時需加入 10%FBS, 0.001 mg/ml puromycin, 0.2mg/ml G418，1%Anti-Anti。

注意事項：

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。

使用范圍

本產品僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用。