一、細胞簡介

細胞簡介

NCI-H716細胞是1984年從一名33歲白人男性結腸腺癌患者的腹水轉移病灶中分離出的，患者取樣前經過5-氟尿嘧啶治療。NCI-H716細胞含有多巴脫羧酶，與其他結直腸細胞系不同，含有內分泌分泌特征的細胞質致密核心顆粒。NCI-H716細胞不表達TAG-72或CA19-9抗原，也不產生癌胚抗原（CEA）。

細胞名稱

NCI-H716 人結直腸腺癌細胞

細胞別稱

NCI H716; H716; H-716; NCIH716

細胞貨號

Delf-10189

來源

33歲；白人；男性；腹水

細胞形態(tài)

上皮細胞樣

生長特性

懸浮生長

鑒定報告

提供STR鑒定

培養(yǎng)條件

1640培養(yǎng)基（貨號：Delf-16564）；特級胎牛血清+10%（貨號：Delf-11405）；

雙抗+1%（貨號：Delf-15487）。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細胞復蘇方法

復蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL基礎培養(yǎng)基（含10%FBS）的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞；
4、將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細胞傳代方法（懸浮細胞）

傳代比例

1:2（不同細胞情況具體對待）

傳代方法

1、當細胞量達到 8-10×10⁵cell/ml 時，可進行傳代；

2、在生物安全柜內，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內的細胞懸液至離心管中；

3、1000rpm 離心 5min，離心完成后，棄上清；

4、準備兩個新的T-25 培養(yǎng)瓶。向細胞沉淀加入完全培養(yǎng)基重懸，調整細胞密度為2-4×10⁵cell/ml，均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶中，每瓶約6-8ml；

5、水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO₂ 培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

注意事項

注意收集懸浮的細胞

四、細胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配（推薦使用DELF無血清非程序細胞凍存液Delf-16090進行凍存細胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

建議每瓶T25瓶凍存1支。

凍存方法

1、待細胞生長狀態(tài)良好時，即可進行細胞凍存；

2、收集細胞懸液，計數；

3、1000rpm 離心 5min，離心完成后，棄上清；

4、加入細胞凍存液重懸細胞沉淀，調整細胞密度為2×10⁶ cell/ml，輕輕混勻后，將細胞懸液加入凍存管，1ml/支。

5、將凍存管轉入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉入-80℃冰箱中過夜降溫；

6、次日取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉入液氮罐中保存；

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產品僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用。

細胞培養(yǎng)清除試劑