一、細胞簡介

細胞簡介

L1210是從一只8個月大、患有淋巴細胞白血病的雌性小鼠皮膚中分離出來的一種淋巴母細胞形態(tài)細胞系，該小鼠的皮膚在乙醚中加入0.2%的甲基膽蒽后發(fā)育。該細胞系可用于免疫系統(tǒng)疾病的研究。此細胞系廣泛用于化學因子和天然產(chǎn)物細胞毒活性的常規(guī)篩選以及用于腫瘤治療藥物的篩選及腫瘤探討方面的研究.

細胞名稱

L1210小鼠淋巴細胞白血病細胞

細胞貨號

Delf-24666

來源

8月齡；雌性；小鼠皮膚

細胞形態(tài)

淋巴母細胞樣

細胞類型

腫瘤細胞

生長特性

懸浮生長

培養(yǎng)條件

DMEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%；雙抗，1%。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細胞復蘇方法

復蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞；
4、將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細胞傳代方法（懸浮細胞）

傳代比例

1:2（不同細胞情況具體對待）

傳代方法

1、當細胞量達到 8-10×10⁵cell/ml 時，可進行傳代；

2、在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的細胞懸液至離心管中；

3、1000rpm 離心 5min，離心完成后，棄上清；

4、準備兩個新的T-25 培養(yǎng)瓶。向細胞沉淀加入完全培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細胞密度為2-4×10⁵cell/ml，均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶中，每瓶約6-8ml；

5、水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO₂ 培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

注意事項

注意收集懸浮的細胞

四、細胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

凍存規(guī)格

建議每瓶T25瓶凍存1支。

凍存方法

1、待細胞生長狀態(tài)良好時，即可進行細胞凍存；

2、收集細胞懸液，計數(shù)；

3、1000rpm 離心 5min，離心完成后，棄上清；

4、加入細胞凍存液重懸細胞沉淀，調(diào)整細胞密度為2×10⁶ cell/ml，輕輕混勻后，將細胞懸液加入凍存管，1ml/支。

5、將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

6、次日取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存；

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。