一鍵復(fù)制產(chǎn)品信息
產(chǎn)品推薦
聯(lián)系方式
- 電話(huà)：400-1016-218
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- 地址：安徽省合肥市高新區(qū)黃山路602號(hào)合肥國(guó)家大學(xué)科技園A401室
產(chǎn)品詳情
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本試劑盒設(shè)計(jì)用于從血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)液上清、病毒原液及感染病毒的組織中快速分離各種病毒DNA/RNA。通過(guò)本公司自主研發(fā)的超順磁性磁珠，在特殊的緩沖體系作用下，核酸特異的吸附于磁性粒子表面，蛋白、細(xì)胞碎片以及其他污染物可有效的被漂洗，最后用Nuclease-free Water洗脫得到高質(zhì)量的DNA/RNA。得到的高質(zhì)量DNA/RNA可直接進(jìn)行下游PCR、cDNA合成、RT-qPCR等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
Proteinase K和Carrier RNA冰袋（wet ice）運(yùn)輸，-20℃保存；其余試劑室溫運(yùn)輸，室溫儲(chǔ)存；有效期12個(gè)月。
組成
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Component |
50T |
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Buffer MVL |
10 mL |
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Proteinase K |
1 mL |
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Carrier RNA |
50 μL |
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SweMag Beads |
1 mL |
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Buffer MPA |
12 mL（使用前加入18 mL無(wú)水乙醇） |
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Buffer MPB |
15 mL（使用前加入60 mL無(wú)水乙醇） |
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Nuclease-free Water |
12 mL |
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說(shuō)明書(shū) |
1份 |
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使用前準(zhǔn)備
1. Buffer MVL和Buffer MPA如有沉淀現(xiàn)象，請(qǐng)于37℃加熱溶解，待恢復(fù)室溫后使用。
2. 首次使用前請(qǐng)向Buffer MPA中加入18 mL的無(wú)水乙醇，Buffer MPB中加入60 mL的無(wú)水乙醇。
3. 首次使用前可先將Carrier RNA分裝后于-20℃保存，應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4. 使用組織研磨儀時(shí)，提前將研磨儀預(yù)冷。
5. 自備磁力架。
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 病毒樣本的處理：
a) 血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)液上清和病毒原液的裂解：取10-200 μL的血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)液上清或病毒原液，起始量不足200 μL可用PBS或Nuclease-free Water補(bǔ)至200 μL。
b) 感染病毒的組織裂解：取10-20 mg新鮮或超低溫凍存的感染病毒的組織，置于裝有2-3顆3 mm研磨珠的1.5 mL Nuclease-free離心管或?qū)Ｓ醚心ス苤校⒖虒⒀b有組織的離心管或研磨管置于液氮中，隨后使用組織研磨儀在低溫條件下將組織徹底研磨至勻漿狀（如果組織沒(méi)有被徹底勻漿，將會(huì)影響DNA/RNA的得率和質(zhì)量），研磨后加入200 μL的PBS或Nuclease-free Water。
2. 加入200 μL Buffer MVL，20 μL Proteinase K和1 μL Carrier RNA，充分混勻后于56℃孵育10 min;
3. 加入200 μL無(wú)水乙醇，顛倒混勻，再加入20 μL SweMag Beads（SweMag Beads使用前需渦旋至分散均勻），上下顛倒數(shù)次，至磁珠分散均勻；
4. 室溫放置10 min，期間使用移液器或渦旋儀混勻2-3次，至磁珠分散均勻；
5. 將離心管移至磁力架上靜置30 s，直至磁珠完全吸附，將離心管隨磁力架溫和地上下顛倒數(shù)次，使管壁殘留的磁珠沖刷下來(lái)，待上清清澈后，吸棄上清（為避免影響提取效率，請(qǐng)勿將磁珠吸出）；
6. 移開(kāi)磁力架，加入500 μL Buffer MPA，使用移液器輕輕吹打至磁珠分散均勻，將離心管移至磁力架上靜置30 s，再將離心管隨磁力架溫和地上下顛倒數(shù)次，使管壁殘留的磁珠和鹽分沖刷下來(lái)，待上清清澈后，吸棄上清（為避免影響提取效率，請(qǐng)務(wù)必吸盡離心管內(nèi)殘留的液體）；
7. 移開(kāi)磁力架，加入700 μL Buffer MPB，使用移液器輕輕吹打至磁珠分散均勻，將離心管移至磁力架上靜置30 s，再將離心管隨磁力架溫和地上下顛倒數(shù)次，使管壁殘留的磁珠和鹽分沖刷下來(lái)，待上清清澈后，吸棄上清（為避免影響提取效率，請(qǐng)務(wù)必吸盡離心管內(nèi)殘留的液體）；
8. 重復(fù)操作步驟7；
9. 將離心管蓋打開(kāi)，室溫放置5–10 min，使乙醇完全揮發(fā)（避免磁珠過(guò)度干燥，以免影響核酸得率）；
10. 移開(kāi)磁力架，向離心管中加入50-80 μL Nuclease-free Water，用移液器輕輕吹打至磁珠分散均勻，室溫靜置3 min；
11. 將離心管置于磁力架上，直至磁珠完全吸附，吸取上清至一新的Nuclease-free離心管中，即得高純度的DNA/RNA。
注意事項(xiàng)
1. 操作之前，請(qǐng)務(wù)必認(rèn)真閱讀本產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。
2. 由于提取過(guò)程中加入了Carrier RNA，不能通過(guò)電泳或吸光度計(jì)測(cè)定定量。
3. 本試劑盒提供的Carrier RNA是大腸桿菌來(lái)源的RNA，主要是為了提高微量核酸的回收效率與防止得到的微量RNA被降解，如果PCR擴(kuò)增引物與Carrier RNA具有較高同源性時(shí)，可重新設(shè)計(jì)引物。
4. 磁珠易沉淀，使用前應(yīng)渦旋至磁珠分散均勻。
5. 磁珠懸液在保存過(guò)程中避免冷凍。
6. 向樣本中加入磁珠前，需要將樣本與其他試劑混合均勻。
7. 洗脫前，應(yīng)使乙醇完全揮發(fā)，避免殘留的乙醇影響下游實(shí)驗(yàn)。
8. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
常見(jiàn)問(wèn)題
答：公司提供兩種運(yùn)輸方式供老師選擇，1、復(fù)蘇的活細(xì)胞：采用常溫發(fā)貨的方式，收到即可觀察密度并判斷是否進(jìn)行傳代操作。優(yōu)勢(shì)是省去復(fù)蘇的步驟，細(xì)胞成活率較高。2、凍存的細(xì)胞：采用干冰運(yùn)輸，一般情況下發(fā)貨是2支凍存管，收到后放-80過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期存儲(chǔ)，擇機(jī)復(fù)蘇。優(yōu)勢(shì)是發(fā)貨快，一般一兩天即可收到，缺點(diǎn)是需要自己復(fù)蘇。
答：我公司提供的細(xì)胞大部分都參考資源庫(kù)的培養(yǎng)信息，如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺(tái)。也有少部分細(xì)胞為客戶(hù)提供了替代培養(yǎng)方案，根據(jù)客戶(hù)的意愿進(jìn)行選擇！
答：不可以重復(fù)使用，一般從我公司發(fā)出的細(xì)胞都需要達(dá)到一定的密度后發(fā)出，充液的培養(yǎng)基血清比例會(huì)比正常培養(yǎng)時(shí)所用到的培養(yǎng)液低很多，通常在3-5%，以維持細(xì)胞存活，控制生長(zhǎng)速度，不可以用來(lái)做細(xì)胞培養(yǎng)使用。
答：細(xì)胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點(diǎn)點(diǎn)，一般情況下是為貼壁的細(xì)胞或脫落的細(xì)胞死亡后的產(chǎn)物，懸浮細(xì)胞也會(huì)有這種現(xiàn)象，出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點(diǎn)。通常，白色的圓點(diǎn)是分散分布的，聚團(tuán)類(lèi)的懸浮細(xì)胞可能會(huì)聚團(tuán)出現(xiàn)白色的亮斑，技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。
答：一般情況下，我公司建議客戶(hù)收到細(xì)胞后傳1-2代后即可安排凍存留種，可先凍存1-2支凍存管，凍存的細(xì)胞數(shù)量多一些，便于后期復(fù)蘇。購(gòu)買(mǎi)原代細(xì)胞的客戶(hù)，要充分考慮該細(xì)胞的傳代次數(shù)限制，人源原代細(xì)胞大概可以傳7代左右，鼠源的可以傳3代左右，對(duì)于一些能傳代次數(shù)很少的原代細(xì)胞，不建議凍存，收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實(shí)驗(yàn)。
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郭經(jīng)理：3554285629
