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TRAP染色

TRAP染色，服務(wù)介紹：抗酒石酸酸性磷酸酶染色,又稱Trap染色，是用于檢測(cè)骨、骨細(xì)胞中破骨細(xì)胞的染色，使破骨細(xì)胞呈紅色，細(xì)胞核淺藍(lán)色，用以顯示破骨細(xì)胞的分布及數(shù)量變化。實(shí)驗(yàn)流程：脫蠟至水—染液配制-Trap染色-蘇木素淺染核-脫水封片-顯微鏡鏡檢。1、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min，自來(lái)水洗，蒸餾水洗三遍。2、......

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產(chǎn)品詳情

服務(wù)介紹：

抗酒石酸酸性磷酸酶染色,又稱Trap染色，是用于檢測(cè)骨、骨細(xì)胞中破骨細(xì)胞的染色，使破骨細(xì)胞呈紅色，細(xì)胞核淺藍(lán)色，用以顯示破骨細(xì)胞的分布及數(shù)量變化。

實(shí)驗(yàn)流程：

脫蠟至水—染液配制-Trap染色-蘇木素淺染核-脫水封片-顯微鏡鏡檢。

1、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min，自來(lái)水洗，蒸餾水洗三遍。

2、工作液配制：

Trap孵育液配制：

注：將TRAP染液B與TRAP染液C等比例混合，現(xiàn)配現(xiàn)用。標(biāo)記為B液備用。

將TRAP染液D 20mg用TRAP染液E 1mL溶解，標(biāo)記為C液備用（C液需提前至少3天配置）。

Trap孵育液配制：TRAP染液A 18mL+B液 1mL+C液 1mL混勻，再加TRAP染液F 0.282g，充分溶解過(guò)濾后備用即為TRAP孵育液。

3、孵育染色：將切片用組畫筆化圈后放在（加有一定量的防止切片蒸干的純水）濕盒中，用蒸餾水37℃孵育2h，傾去蒸餾水，將切片重新放置在濕盒中，并滴加過(guò)濾好的現(xiàn)配的trap孵育液放于37℃烤箱孵育20min。

4、蘇木素染色：傾去染液，水洗后，蘇木素染液復(fù)染核15s，分化液分化，返藍(lán)液返藍(lán)。

5、脫水封片：常規(guī)脫水，透明，中性樹(shù)膠封片。

6、顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。

結(jié)果判讀：

破骨細(xì)胞呈酒紅色或淺紅色，細(xì)胞核呈淺藍(lán)色

送樣運(yùn)輸要求：

1.樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上，常溫運(yùn)輸送樣。切勿固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，切勿冷凍結(jié)冰。

2.石蠟切片常溫運(yùn)輸。

常見(jiàn)問(wèn)題

問(wèn)：細(xì)胞的運(yùn)輸方式有哪些？有什么區(qū)別？

答：公司提供兩種運(yùn)輸方式供老師選擇，1、復(fù)蘇的活細(xì)胞：采用常溫發(fā)貨的方式，收到即可觀察密度并判斷是否進(jìn)行傳代操作。優(yōu)勢(shì)是省去復(fù)蘇的步驟，細(xì)胞成活率較高。2、凍存的細(xì)胞：采用干冰運(yùn)輸，一般情況下發(fā)貨是2支凍存管，收到后放-80過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期存儲(chǔ)，擇機(jī)復(fù)蘇。優(yōu)勢(shì)是發(fā)貨快，一般一兩天即可收到，缺點(diǎn)是需要自己復(fù)蘇。

問(wèn)：為什么你們的細(xì)胞和其他公司的細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣？

答：我公司提供的細(xì)胞大部分都參考資源庫(kù)的培養(yǎng)信息，如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺(tái)。也有少部分細(xì)胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案，根據(jù)客戶的意愿進(jìn)行選擇！

問(wèn)：培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液可以重復(fù)使用嗎？

答：不可以重復(fù)使用，一般從我公司發(fā)出的細(xì)胞都需要達(dá)到一定的密度后發(fā)出，充液的培養(yǎng)基血清比例會(huì)比正常培養(yǎng)時(shí)所用到的培養(yǎng)液低很多，通常在3-5%，以維持細(xì)胞存活，控制生長(zhǎng)速度，不可以用來(lái)做細(xì)胞培養(yǎng)使用。

問(wèn)：培養(yǎng)細(xì)胞在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有一些白色的圓點(diǎn)是什么？

答：細(xì)胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點(diǎn)點(diǎn)，一般情況下是為貼壁的細(xì)胞或脫落的細(xì)胞死亡后的產(chǎn)物，懸浮細(xì)胞也會(huì)有這種現(xiàn)象，出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點(diǎn)。通常，白色的圓點(diǎn)是分散分布的，聚團(tuán)類的懸浮細(xì)胞可能會(huì)聚團(tuán)出現(xiàn)白色的亮斑，技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。

問(wèn)：剛買回來(lái)的細(xì)胞如何凍存留種呢？

答：一般情況下，我公司建議客戶收到細(xì)胞后傳1-2代后即可安排凍存留種，可先凍存1-2支凍存管，凍存的細(xì)胞數(shù)量多一些，便于后期復(fù)蘇。購(gòu)買原代細(xì)胞的客戶，要充分考慮該細(xì)胞的傳代次數(shù)限制，人源原代細(xì)胞大概可以傳7代左右，鼠源的可以傳3代左右，對(duì)于一些能傳代次數(shù)很少的原代細(xì)胞，不建議凍存，收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實(shí)驗(yàn)。