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組化制片（滴片/涂片）

組化制片（滴片/涂片），服務(wù)介紹：采集的液體標(biāo)本(如血液、菌液、細(xì)胞等)均勻的涂抹或滴在玻璃片上制成的標(biāo)本,用于后期染色及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室診斷等。實(shí)驗(yàn)周期：1個(gè)工作日。實(shí)驗(yàn)流程：一、涂片制備：1.取細(xì)胞懸液，2800r4℃離心5min，棄上清液，根據(jù)底部沉淀的細(xì)胞量加入2mL甲醇固定。若肉眼看不見細(xì)胞沉淀時(shí)，用3000r/min，4℃離心10min。2.取用甲醇重懸的細(xì)胞懸液，2800r25℃離心5min，棄上清液，根據(jù)底部沉......

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服務(wù)介紹：

采集的液體標(biāo)本(如血液、菌液、細(xì)胞等)均勻的涂抹或滴在玻璃片上制成的標(biāo)本,用于后期染色及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室診斷等。

實(shí)驗(yàn)周期：1個(gè)工作日。

實(shí)驗(yàn)流程：

一、涂片制備：

1.取細(xì)胞懸液，2800r 4℃離心5min，棄上清液，根據(jù)底部沉淀的細(xì)胞量加入2mL甲醇固定。若肉眼看不見細(xì)胞沉淀時(shí)，用3000r/min，4℃離心10min。

2.取用甲醇重懸的細(xì)胞懸液，2800r 25℃離心5min，棄上清液，根據(jù)底部沉淀加入PBS：

①若肉眼看不見細(xì)胞沉淀時(shí)，用3000r/min，25℃離心10min，依然無沉淀時(shí)，留取底部約0.2ml的液體，再加入0.5mL的PBS混勻后用移液槍吸取200μL，滴于提前用組化筆畫好的小圓圈中(3cm×2cm的橢圓);

②若細(xì)胞沉淀量很少，綠豆大小時(shí)，棄上清，留取底部沉淀，加入0.5mL PBS,用移液槍吹打混勻后，吸取200μL，涂于提前用組化筆畫好的小圓圈中(3cm×2cm的橢圓);

③若細(xì)胞沉淀量很多，黃豆大小或更大時(shí)，棄上清，留取底部沉淀，加入2mL PBS,用移液槍吹打混勻后，吸取150μL，涂于提前用組化筆畫好的大圓圈中(最大長(zhǎng)邊約5cm，最大短邊約2cm的橢圓)，在顯微鏡下觀察細(xì)胞量的多少，若還是過厚，再用PBS對(duì)倍稀釋該細(xì)胞懸液，直至在顯微鏡下觀察到細(xì)胞量涂布均勻。

3.用槍將細(xì)胞懸液鋪滿整個(gè)圓圈，涂片放置自然晾干。

二、送樣運(yùn)輸要求：4℃保存運(yùn)輸

常見問題

問：細(xì)胞的運(yùn)輸方式有哪些？有什么區(qū)別？

答：公司提供兩種運(yùn)輸方式供老師選擇，1、復(fù)蘇的活細(xì)胞：采用常溫發(fā)貨的方式，收到即可觀察密度并判斷是否進(jìn)行傳代操作。優(yōu)勢(shì)是省去復(fù)蘇的步驟，細(xì)胞成活率較高。2、凍存的細(xì)胞：采用干冰運(yùn)輸，一般情況下發(fā)貨是2支凍存管，收到后放-80過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期存儲(chǔ)，擇機(jī)復(fù)蘇。優(yōu)勢(shì)是發(fā)貨快，一般一兩天即可收到，缺點(diǎn)是需要自己復(fù)蘇。

問：為什么你們的細(xì)胞和其他公司的細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣？

答：我公司提供的細(xì)胞大部分都參考資源庫的培養(yǎng)信息，如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺(tái)。也有少部分細(xì)胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案，根據(jù)客戶的意愿進(jìn)行選擇！

問：培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液可以重復(fù)使用嗎？

答：不可以重復(fù)使用，一般從我公司發(fā)出的細(xì)胞都需要達(dá)到一定的密度后發(fā)出，充液的培養(yǎng)基血清比例會(huì)比正常培養(yǎng)時(shí)所用到的培養(yǎng)液低很多，通常在3-5%，以維持細(xì)胞存活，控制生長(zhǎng)速度，不可以用來做細(xì)胞培養(yǎng)使用。

問：培養(yǎng)細(xì)胞在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有一些白色的圓點(diǎn)是什么？

答：細(xì)胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點(diǎn)點(diǎn)，一般情況下是為貼壁的細(xì)胞或脫落的細(xì)胞死亡后的產(chǎn)物，懸浮細(xì)胞也會(huì)有這種現(xiàn)象，出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點(diǎn)。通常，白色的圓點(diǎn)是分散分布的，聚團(tuán)類的懸浮細(xì)胞可能會(huì)聚團(tuán)出現(xiàn)白色的亮斑，技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。

問：剛買回來的細(xì)胞如何凍存留種呢？

答：一般情況下，我公司建議客戶收到細(xì)胞后傳1-2代后即可安排凍存留種，可先凍存1-2支凍存管，凍存的細(xì)胞數(shù)量多一些，便于后期復(fù)蘇。購買原代細(xì)胞的客戶，要充分考慮該細(xì)胞的傳代次數(shù)限制，人源原代細(xì)胞大概可以傳7代左右，鼠源的可以傳3代左右，對(duì)于一些能傳代次數(shù)很少的原代細(xì)胞，不建議凍存，收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實(shí)驗(yàn)。