服務(wù)介紹：

免疫熒光六標即利用酪胺信號放大（TSA，Tyramide signal amplification）即TSA技術(shù)，在同一張切片上對六種蛋白同時進行標記，從而可實現(xiàn)對多種蛋白空間定位，定性及半定量分析。

TSA技術(shù)主要原理為熒光標記的酪胺在二抗上偶聯(lián)的HRP與H₂O₂的作用下變?yōu)榛罨睦野凡⒏街诎袠酥車牡鞍桌野彼釟埢希私Y(jié)合是共價結(jié)合。而一抗與靶標、二抗與一抗之間是非共價結(jié)合。通過微波處理，非共價結(jié)合的一抗二抗被打斷并洗脫掉，而共價結(jié)合的熒光酪胺依然附著在靶標周圍，將靶標通過熒光標記顯示出來。在檢測第二個靶標時，相當(dāng)于全新的一輪標記，無需考慮第二輪的抗體是否與第一輪的抗體產(chǎn)生交叉反應(yīng)。只需改變不同種類熒光染料標記TSA即可實現(xiàn)多個靶標的標記。通過多次重復(fù)免疫標記，使用不同的熒光酪胺實現(xiàn)雙重或多重?zé)晒馊旧?

送樣運輸要求：

1、組織樣本放置于10倍樣本體積的通用型組織固定液中固定24h以上，常溫保存運輸石蠟包埋切片。切勿冷凍結(jié)冰，切勿固定時間過長。

2、石蠟切片常溫保存運輸。

3、熒光六標只能做石蠟包埋切片，不能做冰凍切片和細胞爬片。

4、TSA 熒光染料光譜數(shù)據(jù)及我司掃描儀推薦搭配方式

實驗大體流程：

石蠟切片脫蠟至水——微波抗原修復(fù)——畫圈雙氧水封閉——血清封閉——孵育第一種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF440-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第二種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF488-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第三種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF546-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第四種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF594-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第五種一抗——孵育HRP二抗——孵育iF647-TSA——微波處理——血清封閉——孵育第六種一抗——孵育HRP二抗孵育iF700-TSA——DAPI染核——自發(fā)熒光淬滅——抗熒光淬滅封片劑封片——掃描全景成像。

各種熒光素顏色及激發(fā)與發(fā)射波長見下表，可進行對應(yīng)波長的光譜或熒光濾片成像。推薦在我司進行切片全景掃描。

熒光通道類型：