鬼筆環(huán)肽染色
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一鍵復(fù)制產(chǎn)品信息
產(chǎn)品推薦
聯(lián)系方式
- 電話:400-1016-218
- 郵箱:355185756@qq.com
- 地址:安徽省合肥市高新區(qū)黃山路602號合肥國家大學(xué)科技園A401室
產(chǎn)品詳情
服務(wù)介紹:
鬼筆環(huán)肽(phalloidin)可特異性與細胞內(nèi)聚合微絲中的絲狀肌動蛋F-actin結(jié)合,通過藕聯(lián)的熒光素分子,從而顯示微絲骨架在細胞中的分布。與抗體相比,鬼筆環(huán)肽無物種限制,染色特異性極強,染色區(qū)和未染色區(qū)對比性非常清晰,而且標記后的肌動蛋白許多生理特性都得以維持。也適用于甲醛固定和去垢劑通透處理后的組織或細胞樣本。
實驗流程:
1.細胞固定并破膜:培養(yǎng)好的細胞爬片倒去培養(yǎng)基,用PBS洗。4%多聚甲醛固定30min,PBS洗3次,每次5min,滴加0.1%TRITON,破膜20min.
2.加鬼筆環(huán)肽:爬片稍甩干后用組化筆在蓋玻片中間細胞分布均勻的位置畫圈(防止液體流走),加50-100μl鬼筆環(huán)肽工作液,室溫孵育2h,PBS洗3次,每次5 min。
3.DAPI復(fù)染細胞核:爬片用PBS(PH7.4)洗滌3次,每次5min。去除PBS后在圈內(nèi)滴加DAPI染液,避光室溫孵育10min
送樣運輸要求:
按細胞準備流程PFA固定細胞15min后用無菌PBS洗滌后用無菌PBS浸泡,離心管封口膜封好,4℃冰袋保存運輸?shù)綄嶒炇?
常見問題
答:公司提供兩種運輸方式供老師選擇,1、復(fù)蘇的活細胞:采用常溫發(fā)貨的方式,收到即可觀察密度并判斷是否進行傳代操作。優(yōu)勢是省去復(fù)蘇的步驟,細胞成活率較高。2、凍存的細胞:采用干冰運輸,一般情況下發(fā)貨是2支凍存管,收到后放-80過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮長期存儲,擇機復(fù)蘇。優(yōu)勢是發(fā)貨快,一般一兩天即可收到,缺點是需要自己復(fù)蘇。
答:我公司提供的細胞大部分都參考資源庫的培養(yǎng)信息,如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺。也有少部分細胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案,根據(jù)客戶的意愿進行選擇!
答:不可以重復(fù)使用,一般從我公司發(fā)出的細胞都需要達到一定的密度后發(fā)出,充液的培養(yǎng)基血清比例會比正常培養(yǎng)時所用到的培養(yǎng)液低很多,通常在3-5%,以維持細胞存活,控制生長速度,不可以用來做細胞培養(yǎng)使用。
答:細胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點點,一般情況下是為貼壁的細胞或脫落的細胞死亡后的產(chǎn)物,懸浮細胞也會有這種現(xiàn)象,出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點。通常,白色的圓點是分散分布的,聚團類的懸浮細胞可能會聚團出現(xiàn)白色的亮斑,技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。
答:一般情況下,我公司建議客戶收到細胞后傳1-2代后即可安排凍存留種,可先凍存1-2支凍存管,凍存的細胞數(shù)量多一些,便于后期復(fù)蘇。購買原代細胞的客戶,要充分考慮該細胞的傳代次數(shù)限制,人源原代細胞大概可以傳7代左右,鼠源的可以傳3代左右,對于一些能傳代次數(shù)很少的原代細胞,不建議凍存,收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實驗。













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