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普通ECL化學發(fā)光試劑盒（納克級）

目錄價 ￥ 0.00 一鍵復制產(chǎn)品信息

貨號Delf-27103

規(guī)格 50 mL×2 （普通納克級）

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安徽省合肥市高新區(qū)黃山路602號合肥國家大學科技園A401室

產(chǎn)品詳情

產(chǎn)品簡介

本產(chǎn)品是一種靈敏度較高的化學發(fā)光試劑盒，基本原理是以luminol為基礎(chǔ)的化學發(fā)光；可與二抗上偶聯(lián)的辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase, HRP）發(fā)生反應(yīng)而發(fā)光，通過X-光膠片曝光或其他成像方法（如熒光或化學發(fā)光成像儀）進行檢測；檢測極限為納克級，可滿足大部分目的蛋白的曝光實驗需求。

儲存與運輸

冰袋（wet ice）運輸；2-8℃避光保存，有效期12個月。

組成

Component Number	Component	Delf-27103-100ML	Delf-27103-500ML
Delf-27103-1	普通ECL A液	50 mL	250 mL
Delf-27103-2	普通ECL B液	50 mL	250 mL
說明書		1份

操作步驟

1. 將ECL A液和ECL B液等體積混合制成ECL工作液，室溫配制，現(xiàn)配現(xiàn)用；

2. Western Blot實驗中PVDF膜（或NC膜）經(jīng)二抗孵育后，多次洗滌，濾紙吸去多余液體；將膜放在兩片潔凈保鮮膜（或PE手套）中間，加入ECL工作液覆蓋膜表面，此過程應(yīng)小心完成，避免膜與膜之間產(chǎn)生氣泡；

3. 充分反應(yīng)之后，用濾紙或吸水紙吸去多余的ECL工作液，隨后進行壓片檢測或是熒光成像儀檢測；

4. 壓完的膠片用顯影、定影試劑進行顯影和定影（若為熒光成像儀曝光忽略此步驟）；根據(jù)發(fā)光強度調(diào)整曝光條件。

注意事項

1. ECL A液和B液吸液過程中務(wù)必更換槍頭，避免A液、B液交叉污染，致使活性成分失效。

2. 在與膜發(fā)生接觸過程中，請佩戴手套且使用干凈鑷子等潔凈器材，避免外源蛋白質(zhì)及金屬離子污染。

3. 疊氮化鈉會抑制HRP的活性，所有相關(guān)試劑應(yīng)避免使用。

4. ECL工作液配置完成后請于一天內(nèi)使用完，請勿留置到第二天，以免影響實驗結(jié)果的準確性。

5. 各溶液使用后，請蓋緊瓶蓋避光保存，以防失效；特別是B液，含有氧化劑，容易被還原而失效。

6. ECL化學發(fā)光試劑盒選擇參照附表一，一抗及二抗推薦稀釋比測試數(shù)據(jù)均來自自研抗體。

7. ECL化學發(fā)光檢測常見問題及解決方案參照附表二。

8. ECL化學發(fā)光試劑盒A/B液均對人體有害，操作時務(wù)必小心，注意有效防護，避免直接接觸人體或吸入呼吸道。

9. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

附表一：ECL化學發(fā)光試劑盒選擇參照表

產(chǎn)品名稱	普通ECL化學發(fā)光試劑盒	靈敏ECL化學發(fā)光試劑盒	超敏ECL化學發(fā)光試劑盒
檢測極限	納克級	皮克級	飛克級
一抗推薦稀釋比（1 mg/mL儲存液）	1:1000-1:5000	1:4000-1:10000	1:10000-30000
二抗推薦稀釋比（1 mg/mL儲存液）	1:1000-1:6000	1:3000-1:60000	1:6000-150000
特點及適用性	寬范圍，適用性廣	寬范圍，適用性廣，靈敏度高，中豐度蛋白，節(jié)省抗體	極高靈敏度，低豐度蛋白，抗體效價低或比較珍貴

附表二：ECL化學發(fā)光檢測常見問題及解決方案

常見問題	可能原因	解決方法
高背景（背景較高或無特異性條帶）	一抗、二抗稀釋沒有使用正確的緩沖液和濃度	適當降低稀釋比，降低一抗、二抗的濃度
	封閉液使用不正確或封閉不充分	磷酸化蛋白檢測務(wù)必使用BSA或無蛋白封閉液封閉；膜孔徑越小，封閉及洗脫時間應(yīng)越長
	一抗孵育不充分	適當延長孵育時間（4℃孵育過夜）
信號弱	一抗、二抗使用濃度偏低	提高一抗、二抗使用濃度
	蛋白豐度低	增加上樣體積
	蛋白豐度低	換用靈敏度更高的ECL化學發(fā)光試劑盒
熒光迅速猝滅，出現(xiàn)空心條帶（鬼帶）	目的條帶熒光過強，快速消耗發(fā)光底物，底物消耗完之后就會出現(xiàn)反白的情況	降低蛋白上樣量或一抗、二抗的用量
膜上出現(xiàn)棕色或黃色條帶	目標區(qū)域HRP酶含量過于豐富，產(chǎn)生大量自由基，致使HRP酶氧化失活	降低蛋白上樣量或一抗、二抗的用量

常見問題

問：細胞的運輸方式有哪些？有什么區(qū)別？

答：公司提供兩種運輸方式供老師選擇，1、復蘇的活細胞：采用常溫發(fā)貨的方式，收到即可觀察密度并判斷是否進行傳代操作。優(yōu)勢是省去復蘇的步驟，細胞成活率較高。2、凍存的細胞：采用干冰運輸，一般情況下發(fā)貨是2支凍存管，收到后放-80過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮長期存儲，擇機復蘇。優(yōu)勢是發(fā)貨快，一般一兩天即可收到，缺點是需要自己復蘇。

問：為什么你們的細胞和其他公司的細胞培養(yǎng)條件不一樣？

答：我公司提供的細胞大部分都參考資源庫的培養(yǎng)信息，如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺。也有少部分細胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案，根據(jù)客戶的意愿進行選擇！

問：培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液可以重復使用嗎？

答：不可以重復使用，一般從我公司發(fā)出的細胞都需要達到一定的密度后發(fā)出，充液的培養(yǎng)基血清比例會比正常培養(yǎng)時所用到的培養(yǎng)液低很多，通常在3-5%，以維持細胞存活，控制生長速度，不可以用來做細胞培養(yǎng)使用。

問：培養(yǎng)細胞在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有一些白色的圓點是什么？

答：細胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點點，一般情況下是為貼壁的細胞或脫落的細胞死亡后的產(chǎn)物，懸浮細胞也會有這種現(xiàn)象，出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點。通常，白色的圓點是分散分布的，聚團類的懸浮細胞可能會聚團出現(xiàn)白色的亮斑，技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。

問：剛買回來的細胞如何凍存留種呢？

答：一般情況下，我公司建議客戶收到細胞后傳1-2代后即可安排凍存留種，可先凍存1-2支凍存管，凍存的細胞數(shù)量多一些，便于后期復蘇。購買原代細胞的客戶，要充分考慮該細胞的傳代次數(shù)限制，人源原代細胞大概可以傳7代左右，鼠源的可以傳3代左右，對于一些能傳代次數(shù)很少的原代細胞，不建議凍存，收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實驗。