一、細胞簡介

細胞簡介

該細胞系來自15歲男性白人的組織。形態(tài)為上皮形，模式染色體數為55，在免疫抑制小鼠中不致瘤。

細胞名稱

HEPG2-NTCP人肝癌細胞

細胞別稱

HEPG2-NTCP

細胞貨號

Delf-28735

來源

肝細胞癌

細胞形態(tài)

上皮細胞樣

生長特性

貼壁細胞

培養(yǎng)條件

DMEM培養(yǎng)基（貨號：Delf-16563）；優(yōu)質胎牛血清10%（貨號：Delf-11405）；

雙抗1%（貨號：Delf-15487） 建議培養(yǎng)過程加1.0ug/ml puro維持培養(yǎng)。

培養(yǎng)注意事項：

1. hepg2細胞復蘇或傳代后會有少部分的細胞貼壁和部分懸浮的細胞，復蘇兩天后細胞會從貼壁細胞向外開始生長，有時細胞再生長過程中，細胞會再貼壁細胞的上方生長，形成不同的細胞層，這種情況會有發(fā)生。 在細胞復蘇的一周內，培養(yǎng)瓶中 通常會有懸浮的活的細胞團，在換液過程中不要丟棄在這些活的懸浮細胞，可以通過離心（125×g）回收細胞，重新打回到培養(yǎng)瓶中，分離或者丟棄漂浮的活細胞會使細胞數量變少，引起細胞的停滯生長或細胞死亡。

2.培養(yǎng)條件的細微變化，尤其是pH和培養(yǎng)基中血清的質量，可能會影響細胞的生長狀況，在細胞的生長過程中會有細胞內的液泡出現，特別在細胞快要融合是會出現這種情況。培養(yǎng)細胞時使用未被滅活的高質量、低內毒素的胎牛血清，可以使細胞更好的貼壁和形成單層細胞。

3. 細胞在生長過程中可以通過將血清濃度提到到20%來改善細胞生長緩慢的情況。（參考atcc 有關該細胞的描述）

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細胞復蘇方法

復蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL基礎培養(yǎng)基（含10%FBS）的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞；
4、將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法

1、盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2、用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次，吸走潤洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化（1到2分鐘，難消化的細胞適當增加時間）；
5、消化到細胞大部分變圓并脫落，輕敲培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%血清的基礎培養(yǎng)基終止消化；
6、混勻細胞吸出，1000rpm離心5min，棄上清；補加1-2ml完培吹勻；
7、按1:2分配到新的培養(yǎng)瓶中，添加6-8ml完培保持細胞生長；

注意事項

不同品牌胰酶消化時間差別較大，可根據細胞形態(tài)判斷消化進程

四、細胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

凍存規(guī)格

按每1mL凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細胞，計數，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml；
2、將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管；
3、將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存;

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產品僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用。

細胞培養(yǎng)清除試劑