一、細(xì)胞簡(jiǎn)介

細(xì)胞簡(jiǎn)介

BAF3細(xì)胞是IL-3依賴的小鼠原B細(xì)胞系，細(xì)胞系的確切起源尚不清楚，然而進(jìn)行May-Guenwald-Giemsa染色提供了細(xì)胞確實(shí)來(lái)自淋巴背景的證據(jù)。該細(xì)胞系最初被認(rèn)為來(lái)自BALB/c小鼠，但實(shí)際上來(lái)自C3H小鼠。

細(xì)胞名稱

BAF3 小鼠原B細(xì)胞株

細(xì)胞別稱

BA/F3; BaF3; BAF3; Baf3

細(xì)胞貨號(hào)

Delf-10359

來(lái)源

 C3H小鼠；骨髓

細(xì)胞形態(tài)

圓形細(xì)胞

生長(zhǎng)特性

懸浮生長(zhǎng)

培養(yǎng)條件

1640培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%；IL-3 (Mouse) 10ng/ml；雙抗+1%。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細(xì)胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
4、將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細(xì)胞傳代方法（懸浮細(xì)胞）

傳代比例

1:2（不同細(xì)胞情況具體對(duì)待）

傳代方法

1、當(dāng)細(xì)胞量達(dá)到 8-10×10⁵cell/ml 時(shí)，可進(jìn)行傳代；

2、在生物安全柜內(nèi)，打開(kāi)培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶?jī)?nèi)的細(xì)胞懸液至離心管中；

3、1000rpm 離心 5min，離心完成后，棄上清；

4、準(zhǔn)備兩個(gè)新的T-25 培養(yǎng)瓶。向細(xì)胞沉淀加入完全培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細(xì)胞密度為2-4×10⁵cell/ml，均勻鋪于2個(gè)新的培養(yǎng)瓶中，每瓶約6-8ml；

5、水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO₂ 培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

注意事項(xiàng)

注意收集懸浮的細(xì)胞

四、細(xì)胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

凍存規(guī)格

建議每瓶T25瓶?jī)龃?/span>1支。

凍存方法

1、待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，即可進(jìn)行細(xì)胞凍存；

2、收集細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)；

3、1000rpm 離心 5min，離心完成后，棄上清；

4、加入細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞沉淀，調(diào)整細(xì)胞密度為2×10⁶ cell/ml，輕輕混勻后，將細(xì)胞懸液加入凍存管，1ml/支。

5、將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過(guò)夜降溫；

6、次日取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存；

五、注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng)

1、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。