一、細(xì)胞簡(jiǎn)介

細(xì)胞簡(jiǎn)介

該細(xì)胞來(lái)源于54歲白人男性。源于正常成人前列腺周邊組織的上皮細(xì)胞經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)染HPV-18后建系得到該細(xì)胞株。在三維基質(zhì)膠培養(yǎng)時(shí)，在雄激素作用下，RWPE-1細(xì)胞形成腺胞并向培養(yǎng)基中分泌PSA（kallikrein 3, KLK3）。來(lái)源于RWPE-1的細(xì)胞再用Kirstin鼠類腫瘤病毒轉(zhuǎn)染Ki-ras基因，建立了能成瘤的RWPE-2細(xì)胞株和 RWPE2-W99細(xì)胞株。同時(shí)，用N-甲醇-N-硝基脲處理RWPE-1，建立了一系列模擬前列腺癌進(jìn)程中不同時(shí)期的成瘤細(xì)胞株， 分別是 WPE1-NA22, WPE1-NB14, WPE1-NB11 和 WPE1-NB26 細(xì)胞株。 據(jù)提供者報(bào)道，RWPE-1 細(xì)胞株經(jīng)過(guò)檢測(cè)，乙肝、丙肝、人免疫缺陷病毒都呈陰性。

細(xì)胞名稱

RWPE-1 人正常前列腺上皮細(xì)胞

細(xì)胞別稱

RWPE1；RWPE-1

細(xì)胞貨號(hào)

Delf-10397

來(lái)源

54歲；白人；男性；前列腺

細(xì)胞形態(tài)

上皮樣

生長(zhǎng)特性

貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)條件

角質(zhì)細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基或者Defined K-SFM ，添加對(duì)應(yīng)因子；p/s雙抗+1%。

使用0.05%胰酶消化細(xì)胞，由于Defined K-SFM為無(wú)血清培養(yǎng)液無(wú)法終止胰酶消化，所以消化完成后要通過(guò)離心（建議125xg離心5到10分鐘）去除胰酶或者用帶10%血清的培養(yǎng)基來(lái)終止消化，再進(jìn)行后續(xù)操作。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細(xì)胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
4、將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細(xì)胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）

傳代方法

1、盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2、用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次，吸走潤(rùn)洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化（1到2分鐘，難消化的細(xì)胞適當(dāng)增加時(shí)間）；
5、消化到細(xì)胞大部分變圓并脫落，輕敲培養(yǎng)瓶后加入3-4ml完培終止消化；
6、混勻細(xì)胞吸出，1000rpm離心3-5min，棄上清；補(bǔ)加1-2ml完培吹勻；
7、按1:2分配到新的培養(yǎng)瓶中，添加6-8ml完培保持細(xì)胞生長(zhǎng)；

注意事項(xiàng)

不同品牌胰酶消化時(shí)間差別較大，可根據(jù)細(xì)胞形態(tài)判斷消化進(jìn)程

四、細(xì)胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配（推薦使用DELF無(wú)血清非程序細(xì)胞凍存液Delf-16090進(jìn)行凍存細(xì)胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml；
2、將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3、將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒(méi)有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;

五、注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng)

1、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。