一、細(xì)胞簡介

細(xì)胞簡介

U87MG細(xì)胞系由PontenJ等建立，源于惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤。裸鼠皮下接種可成瘤。Problematic cell line: Misidentified. This cell line is not the original glioblastoma cell line established in 1968 at the University of Uppsala. As described in PubMed=27582061 it is most probably also a glioblastoma cell line but whose origin is unknow. See U-87MG Uppsala (Cellosaurus=CVCL_GP63) for the original U-87MG cell line。該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶RFP基因。

細(xì)胞名稱

U87MG+RFP 人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤+RFP

細(xì)胞別稱

U-87MG+RFP; U-87 MG+RFP; U87 MG+RFP; U-87-MG+RFP; U87-MG+RFP; U87MG+RFP; U-87+RFP; U87+RFP; 87 MG+RFP; 87MG+RFP

細(xì)胞貨號

Delf-11529

來源

神經(jīng)膠質(zhì)瘤

細(xì)胞形態(tài)

上皮細(xì)胞樣

生長特性

貼壁生長、貼壁不牢

培養(yǎng)條件

MEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%；2mM L-谷氨酰胺；NEAA+1%；雙抗+1%；

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細(xì)胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
4、將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細(xì)胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定）

傳代方法

1、將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次；
2、PBS潤洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以PBS也要回收到離心管中，注意收集PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化（1到2分鐘，難消化的細(xì)胞適當(dāng)增加時(shí)間）；
5、消化到細(xì)胞大部分變圓并脫落，輕敲培養(yǎng)瓶后加入3-4ml完培終止消化；
6、混勻細(xì)胞吸出，1000rpm離心3-5min，棄上清；補(bǔ)加1-2ml完培吹勻；
7、按1:2分配到新的培養(yǎng)瓶中，添加6-8ml完培保持細(xì)胞生長；

注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng)：

U-87 MG細(xì)胞密度過高會(huì)聚團(tuán)，80%即可傳代。細(xì)胞貼壁不好，溫度低時(shí)細(xì)胞容易收縮脫落漂浮,生長過程中會(huì)出現(xiàn)懸浮細(xì)胞，在換液和傳代過程中需要離心回收懸浮的細(xì)胞,丟棄懸浮的細(xì)胞會(huì)使細(xì)胞的密度變低。由于細(xì)胞貼壁性不佳，建議使用Corning CellBIND (3289) 培養(yǎng)瓶。

四、細(xì)胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配（推薦使用DELF無血清非程序細(xì)胞凍存液Delf-16090進(jìn)行凍存細(xì)胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml；
2、將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3、將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;

五、注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng)

1、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。