一、細胞簡介

細胞簡介

NCI-H295R細胞是源于多能腎上腺皮質(zhì)癌細胞系NCI-H295細胞，后者由Gazdar·A·F等建立，從腎上腺皮質(zhì)的腫瘤中分離而來。NCI-H295細胞經(jīng)改變培養(yǎng)條件獲得了NCI-295R細胞，群體倍增時間從原來的5天減為2天。NCI-295細胞懸浮生長，而NCI-H295R細胞呈單層貼壁生長。NCI-H295R細胞保留了產(chǎn)生雄激素的能力，對血管緊張素Ⅱ和鉀離子有反應。

細胞名稱

NCI-H295R 人腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞

細胞別稱

NCI H295R; NCIH295R; H295R; H-295R; H295R-S1

細胞貨號

Delf-10448

來源

48歲；女性；腎上腺

細胞形態(tài)

上皮細胞樣

生長特性

貼壁生長

培養(yǎng)條件

DMEM/F12培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%；Insulin+6.25μg/mL；Transferrin+6.25μg/mL＋+Selenium+6.25ng/mL；5.35μg/mL+LinoleicAcid（sigma，L5900）；p/s雙抗+1%。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細胞復蘇方法

復蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞；
4、將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法

1、盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2、用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次，吸走潤洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化（1到2分鐘，難消化的細胞適當增加時間）；
5、消化到細胞大部分變圓并脫落，輕敲培養(yǎng)瓶后加入3-4ml完培終止消化；
6、混勻細胞吸出，1000rpm離心3-5min，棄上清；補加1-2ml完培吹勻；
7、按1:2分配到新的培養(yǎng)瓶中，添加6-8ml完培保持細胞生長；

注意事項

不同品牌胰酶消化時間差別較大，可根據(jù)細胞形態(tài)判斷消化進程

四、細胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配（推薦使用DELF無血清非程序細胞凍存液Delf-16090進行凍存細胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細胞，計數(shù)，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml；
2、將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管；
3、將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。