一、細胞簡介

細胞簡介

SHP-77 保留了SCLC的重要特征，具有穩(wěn)定的生物化學特性，可以連續(xù)培養(yǎng)。該細胞系是小細胞肺癌中一種不常見的未分化大細胞突變體。它雖然具有突變體的形態(tài)，但保持了經(jīng)典SCLC的生化特性。電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)存在腺體形成和胞漿內板層體(intracytoplasmic lamellar bodies)。這些細胞表達神經(jīng)內分泌標記物L-多巴脫羧酶和致密核心分泌顆粒(dense core secretory granules)。

SHP-77可用做檢測51Cr和111In釋放對體外細胞及裸鼠體內毒性的靶標，用于評估肺癌患者的細胞和血清的免疫反應水平。該細胞可用于評估接受放射或化學療法治療的SCLC患者的免疫狀況。經(jīng)本庫STR檢測無誤。

STR鑒定結果為：Amelogenin: X,X；CSF1PO: 10,11；D13S317: 8,8；D16S539: 11,11；D5S818: 12,12；D7S820: 11,11；TH01: 7,7；TPOX: 9,11；vWA: 16,16。

細胞名稱

SHP-77 人小細胞肺癌細胞

細胞別稱

SHP-77；SHP77; Shadyside Hospital Pittsburgh-77

細胞貨號

Delf-12086

來源

54歲；白人；男性；肺

細胞形態(tài)

圓形

生長特性

懸浮+松散貼壁

培養(yǎng)條件

1、1640培養(yǎng)基（貨號：Delf-16564）；

2、優(yōu)質胎牛血清10%（貨號：Delf-11405）；

3、GlutaMAX-1谷氨酰胺（貨號：Delf-16091）；

4、Sodium Pyruvate丙酮酸鈉+1%（貨號：Delf-16093）；

5、雙抗1%（貨號：Delf-15487）。

注意: 該細胞參考傳代周期：4-6天,參考換液頻率：每2-3天換1次液,傳代時可以輕輕拍打細胞培養(yǎng)瓶側面十余次，將懸浮的細胞進行收集離心，以40萬~50萬/ mL的密度重懸傳代。輕輕拍打后顯微鏡下觀察仍貼壁未懸浮的細胞量多的話可以繼續(xù)拍打重復收集，細胞量很少的則丟棄，不收集傳代。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細胞復蘇方法

復蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL基礎培養(yǎng)基（含10%FBS）的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞；
4、將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細胞傳代方法（混合生長細胞）

傳代比例

1:2（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法

1、將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次；
2、PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中，注意收集PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化（1到2分鐘，難消化的細胞適當增加時間）；
5、消化到細胞大部分變圓并脫落，輕敲培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的基礎培養(yǎng)基終止消化；
6、混勻細胞吸出，1000rpm離心5min，棄上清；補加1-2ml完培吹勻；
7、按1:2分配到新的培養(yǎng)瓶中，添加6-8ml完培保持細胞生長；

注意事項

不同品牌胰酶消化時間差別較大，可根據(jù)細胞形態(tài)判斷消化進程

四、細胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配（推薦使用DELF無血清非程序細胞凍存液Delf-16090進行凍存細胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細胞，計數(shù)，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml；
2、將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管；
3、將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存;

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產品僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用。

細胞培養(yǎng)清除試劑