一、細(xì)胞簡(jiǎn)介

細(xì)胞簡(jiǎn)介

1970年G. Trempe 和 L.J. Old從胸水中建立了這株細(xì)胞。沒(méi)有病毒顆粒。超微結(jié)構(gòu)特征包括微絲和橋粒，肝糖原顆粒，大溶酶體，成束的細(xì)胞質(zhì)纖絲。SK-BR-3細(xì)胞株過(guò)表達(dá)HER2/c-erb-2基因產(chǎn)物。

細(xì)胞名稱

SK-BR-3 人乳腺腺癌細(xì)胞

細(xì)胞別稱

SK-Br-3; Sk-Br-3; SK BR 03; SKBR-3; SKBr-3; SK-BR3; SKBr3; SkBr3; SKBR3

細(xì)胞貨號(hào)

Delf-10493

來(lái)源

43歲；白人；女性；胸水

細(xì)胞形態(tài)

上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性

貼壁生長(zhǎng)

鑒定報(bào)告

提供STR鑒定

培養(yǎng)條件

McCOY's 5A培養(yǎng)基（貨號(hào)：Delf-16573）；優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%（貨號(hào)：Delf-11405）；

雙抗+1%（貨號(hào)：Delf-15487）。

注意事項(xiàng)：

（1）該細(xì)胞復(fù)蘇后恢復(fù)緩慢，剛復(fù)蘇或傳代的細(xì)胞貼壁能力較弱，可能呈現(xiàn)不典型的上皮形態(tài)或圓形，這是正常現(xiàn)象。

（2）為了避免干擾細(xì)胞貼壁，請(qǐng)復(fù)蘇或傳代48小時(shí)后再進(jìn)行后續(xù)操作。此外，在細(xì)胞融合度達(dá)到70%-80%之前不要進(jìn)行傳代。

（3）該細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng)可能會(huì)從培養(yǎng)瓶底部脫落，傳代時(shí)可將脫落的細(xì)胞收集后一起傳代。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細(xì)胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含10%FBS）的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
4、將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細(xì)胞傳代方法（注意收集）

傳代比例

1:2（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）

傳代方法

1、將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次；
2、PBS潤(rùn)洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以PBS也要回收到離心管中，注意收集PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化（1到2分鐘，難消化的細(xì)胞適當(dāng)增加時(shí)間）；
5、消化到細(xì)胞大部分變圓并脫落，輕敲培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的基礎(chǔ)培養(yǎng)基終止消化；
6、混勻細(xì)胞吸出，1000rpm離心5min，棄上清；補(bǔ)加1-2ml完培吹勻；
7、按1:2分配到新的培養(yǎng)瓶中，添加6-8ml完培保持細(xì)胞生長(zhǎng)；

注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng):

(1) SK-BR-3細(xì)胞在復(fù)蘇或傳代后細(xì)胞需要24-48小時(shí)貼壁，細(xì)胞在培養(yǎng)48小時(shí)后再進(jìn)行換液操作。

(2) 細(xì)胞系在復(fù)蘇后第一周以及每次繼代培養(yǎng)后都表現(xiàn)出貼壁細(xì)胞呈上皮樣或圓形。圓形細(xì)胞松散地附著在一起。細(xì)胞在培養(yǎng)中每2-3天換液時(shí)將圓細(xì)胞離心收集再放回培養(yǎng)瓶中一起培養(yǎng)。

(3) 細(xì)胞胞體上有黑色顆粒并且分泌少量黑色顆粒是正常現(xiàn)象。

四、細(xì)胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配（推薦使用DELF無(wú)血清非程序細(xì)胞凍存液Delf-16090進(jìn)行凍存細(xì)胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml；
2、將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3、將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒(méi)有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;

五、注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng)

1、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

細(xì)胞培養(yǎng)清除試劑