一、細(xì)胞簡(jiǎn)介

細(xì)胞簡(jiǎn)介

MDA-MB-468細(xì)胞是由Cailleau·R等人于1977年從一位患有轉(zhuǎn)移性乳腺癌的51歲黑人女性的胸腔積液中分離得到的，雖然供體組織的G6PD等位基因雜合，但MDA-MB-468細(xì)胞始終表現(xiàn)為G6PD A表型。MDA-MB-468細(xì)胞p53基因273位密碼子存在G→A突變，從而導(dǎo)致Arg→His替代。MDA-MB-468細(xì)胞表達(dá)EGF、TGF-alpha，每個(gè)細(xì)胞上存在1×10^6個(gè)EGF受體。MDA-MB-468細(xì)胞可以用于3D細(xì)胞培養(yǎng)、乳腺癌和免疫腫瘤學(xué)研究，也是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主。

細(xì)胞名稱(chēng)

MDA-MB-468 人乳腺癌細(xì)胞

細(xì)胞別稱(chēng)

MDA-MB 468; MDA-MB468; MDAMB468; MDA-468; MDA468; MB468; MD Anderson-Metastatic Breast-468

細(xì)胞貨號(hào)

Delf-10496

來(lái)源

51歲；美籍黑人；女性；胸腔積液

細(xì)胞形態(tài)

上皮細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性

貼壁生長(zhǎng)

鑒定報(bào)告

提供STR鑒定

培養(yǎng)條件

L15培養(yǎng)基（貨號(hào)：Delf-16571）；優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%（貨號(hào)：Delf-11405）；

雙抗+1%（Delf-15487）；

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，100%；該細(xì)胞培養(yǎng)不能通入CO₂，如果沒(méi)有條件準(zhǔn)備空氣氣相100%的培養(yǎng)箱的，可以采用不透氣密封蓋的T25培養(yǎng)瓶來(lái)培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中每天將細(xì)胞拿出培養(yǎng)箱換1-2次空氣。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細(xì)胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含10%FBS）的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
4、將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細(xì)胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）

傳代方法

1、盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2、用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次，吸走潤(rùn)洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化（1到2分鐘，難消化的細(xì)胞適當(dāng)增加時(shí)間）；
5、消化到細(xì)胞大部分變圓并脫落，輕敲培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的基礎(chǔ)培養(yǎng)基終止消化；
6、混勻細(xì)胞吸出，1000rpm離心5min，棄上清；補(bǔ)加1-2ml完培吹勻；
7、按1:2分配到新的培養(yǎng)瓶中，添加6-8ml完培保持細(xì)胞生長(zhǎng)；

注意事項(xiàng)

不同品牌胰酶消化時(shí)間差別較大，可根據(jù)細(xì)胞形態(tài)判斷消化進(jìn)程

四、細(xì)胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配（推薦使用DELF無(wú)血清非程序細(xì)胞凍存液Delf-16090進(jìn)行凍存細(xì)胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱(chēng)、代數(shù)、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml；
2、將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3、將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒(méi)有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;

五、注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng)

1、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿(mǎn)液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類(lèi)疾病的治療產(chǎn)品使用。

細(xì)胞培養(yǎng)清除試劑