一、細胞簡介

細胞簡介

該細胞系由PontenJ等建立，源于惡性神經膠質瘤。裸鼠皮下接種可成瘤。Problematic cell line: Misidentified. This cell line is not the original glioblastoma cell line established in 1968 at the University of Uppsala. As described in PubMed=27582061 it is most probably also a glioblastoma cell line but whose origin is unknow. See U-87MG Uppsala (Cellosaurus=CVCL_GP63) for the original U-87MG cell line.

細胞名稱

U87MG 人腦星形膠質母細胞瘤

細胞別稱

U-87MG; U-87 MG; U87 MG; U-87-MG; U87-MG; U87MG; U-87; U87; 87 MG; 87MG

細胞貨號

Delf-10592

來源

神經膠質瘤

細胞形態(tài)

上皮細胞樣

生長特性

貼壁生長、貼壁不牢

鑒定報告

提供STR鑒定

培養(yǎng)條件

DMEM培養(yǎng)基（貨號：Delf-16563）；優(yōu)質胎牛血清+10%（貨號：Delf-11405）；

雙抗+1%（貨號：Delf-15487）；

注意事項：

(1) U-87 MG細胞密度過高會聚團，80%即可傳代。細胞貼壁不好，溫度低時細胞容易收縮脫落漂浮,生長過程中會出現懸浮細胞，在換液和傳代過程中需要離心回收懸浮的細胞,丟棄懸浮的細胞會使細胞的密度變低.

(2) 由于細胞貼壁性不佳，建議使用Corning CellBIND (3289) 培養(yǎng)瓶。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細胞復蘇方法

復蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL基礎培養(yǎng)基（含10%FBS）的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞；
4、將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法

1、將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次；
2、PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中，注意收集PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化（1到2分鐘，難消化的細胞適當增加時間）；
5、消化到細胞大部分變圓并脫落，輕敲培養(yǎng)瓶后加入3-4ml基礎培養(yǎng)基（含10%FBS）終止消化；
6、混勻細胞吸出，1000rpm離心5min，棄上清；補加1-2ml完培吹勻；
7、按1:2分配到新的培養(yǎng)瓶中，添加6-8ml完培保持細胞生長；

注意事項

培養(yǎng)細胞的過程中細胞會發(fā)生堆疊和松散貼壁的細胞團這是正常的。需要 2-3 天對細胞進行一次換液以保證細胞的正常生長。該細胞貼壁較慢，復蘇細胞后 48h 內盡量不要移動細胞讓細胞達到最佳的貼壁狀態(tài)。生長過程中會懸浮細胞出現，在換液和傳代過程中需要離心回收懸浮的細胞。丟棄懸浮的細胞會使細胞的密度變低，這個細胞在培養(yǎng)過程中不會達到 100%的融合。細胞生長過密會引起貼壁的細胞變成懸浮的狀態(tài)。明膠或多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)瓶可以使細胞更好的貼壁。

四、細胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配（推薦使用DELF無血清非程序細胞凍存液Delf-16090進行凍存細胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細胞，計數，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml；
2、將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管；
3、將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存;

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產品僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用。

細胞培養(yǎng)清除試劑