一、細胞簡介

細胞簡介

該細胞來源于人的正常外周血組織。T淋巴細胞來源于骨髓的多能干細胞，骨髓中的一部分多能干細胞或前T細胞遷移到胸腺內，在胸腺激素的誘導下分化成熟，成為具有免疫活性的T細胞。T細胞是相當復雜的不均一體、又不斷在體內更新、在同一時間可以存在不同發(fā)育階段或功能的亞群，按免疫應答中的功能不同，可將T細胞分成若干亞群：輔助性T細胞（Helper T cells,Th）、抑制性T細胞（Suppressor T cells,Ts）、效應T細胞（Effector T cells,Te）、細胞毒性T細胞（Cytotoxic T cells,Tc）、遲發(fā)性變態(tài)反應T細胞（Delayed type hypersensitivityT cells,Td）、放大T細胞（Ta），、原始的或天然T細胞（Naive T cells）、記憶T細胞（Memory T cell,Tm）。

T細胞是淋巴細胞的主要組分，它具有多種生物學功能，如直接殺傷靶細胞，輔助或抑制B細胞產生抗體，對特異性抗原和促有絲分裂原的應答反應以及產生細胞因子等，T細胞產生的免疫應答是細胞免疫，細胞免疫的效應形式主要有兩種：與靶細胞特異性結合，破壞靶細胞膜，直接殺傷靶細胞；另一種是釋放淋巴因子，最終使免疫效應擴大和增強。

細胞名稱

人原代T淋巴細胞（Human primary T lymphocytes）

細胞貨號

Delf-10725

來源

人；正常外周血

形態(tài)特性

淋巴細胞樣，懸浮生長

細胞鑒定

CD3免疫熒光染色為陽性。

培養(yǎng)條件

推薦使用人原代T淋巴細胞專用培養(yǎng)基（貨號：Delf-26250）來培養(yǎng)該細胞。

名稱

體積

濃度

保存條件

人原代T淋巴細胞基礎培養(yǎng)基

440ml

1×

4℃、避光

人原代T淋巴細胞培養(yǎng)添加劑

5ml

100×

-20℃、避光

胎牛血清（FBS）

50mL

終濃度10%

-20℃、避光

雙抗（青霉素/鏈霉素，P/S）

5ml

100×

-20℃、避光

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細胞復蘇方法

復蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4ml常規(guī)培養(yǎng)基（含10%FBS）的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞；
4、將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的T25培養(yǎng)瓶（或6cm皿）中37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)；

三、細胞傳代方法（懸浮細胞）

傳代比例

1:2（不同細胞情況具體對待）

傳代方法

1、當細胞量達到 8-10×10⁵cell/ml 時，可進行傳代；

2、在生物安全柜內，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內的細胞懸液至離心管中；

3、1000rpm 離心 5min，離心完成后，棄上清；

4、準備兩個新的T-25 培養(yǎng)瓶。向細胞沉淀加入完全培養(yǎng)基重懸，調整細胞密度為2-4×10⁵cell/ml，均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶中，每瓶約6-8ml；

5、水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO₂ 培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

注意事項

注意收集懸浮的細胞

四、細胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配（推薦使用原代細胞無血清凍存液Delf-11614進行凍存細胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細胞，計數(shù)，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml（本公司是1個T25培養(yǎng)瓶長滿凍存1支凍存管）；
2、將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管；
3、將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存;

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產品僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用。

細胞培養(yǎng)清除試劑