一、細(xì)胞簡(jiǎn)介

細(xì)胞簡(jiǎn)介

該細(xì)胞來源于人的正常胃組織。胃是人體的消化器官，位于膈下，胃壁由黏膜、黏膜下層、肌層和外膜四層組成，并有神經(jīng)、血管和淋巴管的分布。其中成纖維細(xì)胞主要分布于粘膜層中的固有層、黏膜下層和外膜層。成纖維細(xì)胞是結(jié)締組織中最常見的細(xì)胞，電鏡下，成纖維細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和高爾基復(fù)合體，表明其具有合成和分泌蛋白質(zhì)的功能。己知成纖維細(xì)胞的主要功能之一是合成膠原蛋白及其他細(xì)胞外基質(zhì)，在組織器官纖維化過程中發(fā)揮重要作用。

細(xì)胞名稱

人原代胃成纖維細(xì)胞

細(xì)胞別稱

Human primary gastric fibroblasts cells

細(xì)胞貨號(hào)

Delf-10784

來源

人；正常胃

細(xì)胞形態(tài)

成纖維樣細(xì)胞

生長(zhǎng)特性

貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞鑒定

纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色為陽性。

培養(yǎng)條件

推薦使用人原代胃成纖維細(xì)胞專用培養(yǎng)基（貨號(hào)：Delf-25681）來培養(yǎng)該細(xì)胞。

名稱

體積

濃度

保存條件

人原代胃成纖維細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基

440ml

1×

4℃、避光

人原代胃成纖維細(xì)胞培養(yǎng)添加劑

5ml

100×

-20℃、避光

胎牛血清（FBS）

50mL

終濃度10%

-20℃、避光

雙抗（青霉素/鏈霉素，P/S）

5mL

100×

-20℃、避光

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細(xì)胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4ml常規(guī)培養(yǎng)基（含10%FBS）的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
4、將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的T25培養(yǎng)瓶（或6cm皿）中37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)；

三、細(xì)胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）

傳代方法

1、盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2、用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1次，吸走潤(rùn)洗的PBS；
3、加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化2min左右（不同胰酶，消化時(shí)間不同，要根據(jù)細(xì)胞脫落情況，在進(jìn)行終止消化）；
5、輕輕側(cè)拍T25培養(yǎng)瓶鏡下觀察，消化到細(xì)胞脫落在胰酶當(dāng)中后，加入2-3ml含10%FBS的常規(guī)培養(yǎng)基終止消化；
6、1000rpm離心5min，收集到15ml離心管中加2ml該細(xì)胞完全培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞時(shí)，在離心管中輕輕吹打，把細(xì)胞混勻；
7、按1:2分配到新的T25培養(yǎng)瓶中，添加4-5ml完全培養(yǎng)基放回37℃培養(yǎng)箱；

注意事項(xiàng)

不同品牌胰酶消化時(shí)間差別較大，可根據(jù)細(xì)胞形態(tài)判斷消化進(jìn)程

四、細(xì)胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配（推薦使用原代細(xì)胞無血清凍存液Delf-11614進(jìn)行凍存細(xì)胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml（本公司是1個(gè)T25培養(yǎng)瓶長(zhǎng)滿凍存1支凍存管）；
2、將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3、將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;

五、注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng)

1、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

細(xì)胞培養(yǎng)清除試劑