一、細(xì)胞簡(jiǎn)介

細(xì)胞簡(jiǎn)介

該細(xì)胞來(lái)源于人的正常冠狀動(dòng)脈組織。

冠狀動(dòng)脈是供給心臟血液的動(dòng)脈，起于主動(dòng)脈根部，分左右兩支，行于心臟表面。冠狀動(dòng)脈疾病發(fā)生和發(fā)展的一個(gè)主要因素是由于血管平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)變成為了具有繁殖能力的表型。

近期的研究表明平滑肌細(xì)胞能表達(dá)鈣離子通道，ICAM-1和VCAM-1。其中ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)可能是造成血管壁炎癥反應(yīng)，并進(jìn)一步造成血管疾病的原因 。因此，對(duì)冠狀動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞的體外培養(yǎng)和研究可用來(lái)發(fā)現(xiàn)和確定新的冠狀血管疾病的靶向治療方法。

細(xì)胞名稱(chēng)

人原代冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

細(xì)胞別稱(chēng)

Primary human coronary artery smooth muscle cells

細(xì)胞貨號(hào)

Delf-10816

來(lái)源

人；正常冠狀動(dòng)脈

細(xì)胞形態(tài)

長(zhǎng)梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞

生長(zhǎng)特性

貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)條件

推薦使用DELF原代平滑肌細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)該細(xì)胞。

名稱(chēng)

體積

濃度

保存條件

原代平滑肌細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基

500ml

1×

4℃、避光

原代平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)添加劑

5ml

100×

-20℃、避光

胎牛血清（FBS）

50ml

終濃度10%

-20℃、避光

雙抗（青霉素/鏈霉素，P/S）

5ml

100×

-20℃、避光

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細(xì)胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
4、將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細(xì)胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）

傳代方法

1、盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2、用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次，吸走潤(rùn)洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化（1到2分鐘，難消化的細(xì)胞適當(dāng)增加時(shí)間）；
5、消化到細(xì)胞大部分變圓并脫落，輕敲培養(yǎng)瓶后加入3-4ml完培終止消化；
6、混勻細(xì)胞吸出，1000rpm離心3-5min，棄上清；補(bǔ)加1-2ml完培吹勻；
7、按1:2分配到新的培養(yǎng)瓶中，添加6-8ml完培保持細(xì)胞生長(zhǎng)；

注意事項(xiàng)

不同品牌胰酶消化時(shí)間差別較大，可根據(jù)細(xì)胞形態(tài)判斷消化進(jìn)程

五、注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng)

1、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒(méi)在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿(mǎn)液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類(lèi)疾病的治療產(chǎn)品使用。