細胞介紹

K562/ADR為由K562細胞構建的耐ADR藥物細胞株。

細胞特性

1）來源：人慢性髓系白血病細胞耐藥篩選

2）形態(tài)：淋巴母細胞樣；圓形，懸浮生長

3）含量：>1×10⁶細胞數(shù)

4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅供科研使用。

運輸和保存：干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1、收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細胞有污染；或凍存管有破損，融化、漏液等，請立即拍照并聯(lián)系我們。照片包括細胞培養(yǎng)瓶/凍存管外觀，顯微鏡下細胞照片（100倍，200倍各2張）；

2、復蘇細胞的充液培養(yǎng)基為不含藥物的維持培養(yǎng)基，血清濃度較低，收到細胞后請及時更換為完全培養(yǎng)基；

3、建議收到細胞后，首先進行擴增（至少3代），并凍存部分細胞以備用。

4、初次培養(yǎng)，當細胞密度達8×10⁵個/mL時，可加入500ng/mL ADR的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細胞細胞密度達1×10⁶個/mL后傳代。細胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至1ug/mL繼續(xù)培養(yǎng)；若此過程中細胞停止增殖，且狀態(tài)較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細胞密度達8×10⁵個/mL，且生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的ADR藥物濃度。

5、細胞凍存過程中，不可添加藥物。

細胞培養(yǎng)試劑的配制

1）ADR藥物的配制及保存

建議將ADR藥物配制成1mg/mL的母液，即使用10mL PBS溶液溶解10mg ADR藥物，使其完全溶解后，使用0.22um濾器過濾除菌。

注意：可根據(jù)用量配置藥物，并將藥物分裝保存，避免反復凍融導致藥物失效。溶解后的ADR，4℃保存1周，-20℃保存1個月，-80℃保存6個月。

2）凍存液的配制

90%優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。（凍存液中不含藥物）

3）完全培養(yǎng)基的配制

細胞培養(yǎng)條件

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%~80%。

細胞處理

1）凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4~6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm/min離心3~5min，棄去上清液。加入1mL完全培養(yǎng)基重懸細胞后，均勻鋪于含6~8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中，置于37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

注意：①細胞復蘇過程中，不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細胞密度達約8×105個/mL時，方可添加500ng/mL ADR藥物；若細胞生長狀態(tài)較為緩慢，可適當降低ADR的濃度（首次降低一半藥物濃度），或使用不含ADR的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細胞生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的ADR濃度。

②建議復蘇細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩，避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸，造成人員傷害。

2）細胞傳代（建議以同等底面積的培養(yǎng)瓶/皿按照1：2比例傳代）

懸浮狀態(tài)下生長的細胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細胞的生長狀態(tài)，一般情況下細胞密度維持在1×10⁵~1×10⁶個/mL，可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

注意：細胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至1ug/mL繼續(xù)培養(yǎng)；若此過程中細胞停止增殖，且狀態(tài)較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細胞密度約8×10⁵個/mL，且生長狀態(tài)較好時，再更換為所需的ADR藥物濃度。

3）細胞凍存

①細胞凍存時，收集細胞懸液到離心管中，1000rpm，離心5min，棄去上清。

②細胞計數(shù)后，加入配制好的細胞凍存液，重懸細胞，按照1×10⁶ ~ 1×10⁷個細胞/mL分配到一個凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

注意：細胞凍存過程中，不可添加藥物。

③將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

使用范圍

本產(chǎn)品僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。