一、細(xì)胞簡介

細(xì)胞簡介

THLE-2 是從供體左葉分離的上皮細(xì)胞，TTHLE-2 ( ATCC CRL-2706和 THLE-3 ( ATCC CRL-11233 ) 細(xì)胞系是通過感染 SV40 大 T 抗原從原代正常肝細(xì)胞中獲得的。[RF84749] 該病毒是通過引入含有將SV40 T抗原的Bgl I-Hpa I片段導(dǎo)入兩性包裝細(xì)胞系PA317。[RF84750] THLE-2 和 THLE-3 細(xì)胞表達(dá)正常成人肝上皮細(xì)胞的表型特征。當(dāng)注射到無胸腺裸鼠體內(nèi)時(shí)，它們不會(huì)產(chǎn)生腫瘤，具有接近二倍體的核型，并且不表達(dá)甲胎蛋白。[RF84750] THLE-2 和 THLE-3 細(xì)胞將苯并[a]芘、N-亞硝基二甲胺和黃曲霉毒素 B1 代謝為其最終致癌代謝物，這些代謝物會(huì)加合 DNA，這表明功能性細(xì)胞色素 P450 途徑。[RF84750] 其他參與化學(xué)致癌物代謝的酶，例如環(huán)氧化物水解酶、NADPH 細(xì)胞色素 P450 還原酶、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽 S-轉(zhuǎn)移酶和谷胱甘肽過氧化物酶也被 THLE 細(xì)胞保留。

細(xì)胞名稱

THLE-2 人正常肝細(xì)胞

細(xì)胞別稱

THLE-2；THLE2; Transformed Human Liver Epithelial-2

細(xì)胞貨號(hào)

Delf-16595

來源

肝; 左葉

細(xì)胞形態(tài)

上皮細(xì)胞樣

生長特性

貼壁生長

培養(yǎng)條件

準(zhǔn)備BEGM kit培養(yǎng)基  (Lonza/Clonetics)備注：培養(yǎng)基包含（A+B），ATCC 不使用 BEGM 試劑盒提供的 GA（慶大霉素-兩性霉素 B 混合物） 和腎上腺素（Epinephrine），另向其中添加額外的 5 ng/mL EGF、70 ng/mL 磷酸乙醇胺和 10% FBS。可根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求添加P/S雙抗，1%。

A： BEBM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 500ML      B:  細(xì)胞生長添加劑 一套（包含下列試劑）

● BPE, 2.0 ml ● Hydrocortisone, 0.5 ml  ● hEGF, 0.5 ml

● Epinephrine, 0.5ml  ● Insulin,0.5 ml   ● Transferrin, 0.5 ml

● Triiodothyronine, 0.5 ml ● Retinoic Acid, 0.5 ml ● GA, 0.5ml

注意：The flasks used should be precoated with a mixture of 0.01 mg/mL fibronectin, 0.03 mg/mL bovine collagen type I and 0.01 mg/mL bovine serum albumin dissolved in BEBM medium.

該細(xì)胞生長緩慢，培養(yǎng)周期2-3周左右。

ATCC上THLE-2細(xì)胞推薦上面的培養(yǎng)條件和試劑來培養(yǎng)該細(xì)胞，因市場長期斷貨，本公司用其它培養(yǎng)體系進(jìn)行培養(yǎng)傳代驗(yàn)證后已經(jīng)穩(wěn)定下來配方，采用的是跟ATCC上類似的無血清培養(yǎng)基來進(jìn)行替代培養(yǎng)。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細(xì)胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含10%FBS）的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
4、將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細(xì)胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定）

傳代方法

1、盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2、用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次，吸走潤洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化（1到2分鐘，難消化的細(xì)胞適當(dāng)增加時(shí)間）；
5、消化到細(xì)胞大部分變圓并脫落，輕敲培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的基礎(chǔ)培養(yǎng)基終止消化；
6、混勻細(xì)胞吸出，1000rpm離心5min，棄上清；補(bǔ)加1-2ml完培吹勻；
7、按1:2分配到新的培養(yǎng)瓶中，添加6-8ml完培保持細(xì)胞生長；

注意事項(xiàng)

不同品牌胰酶消化時(shí)間差別較大，可根據(jù)細(xì)胞形態(tài)判斷消化進(jìn)程

四、細(xì)胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配（推薦使用DELF無血清非程序細(xì)胞凍存液Delf-16090進(jìn)行凍存細(xì)胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個(gè)活細(xì)胞/ml；
2、將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3、將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;

五、注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng)

1、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。