一、細(xì)胞簡介

細(xì)胞簡介

由1991年患有中度分化子宮內(nèi)膜腺癌(G2級)的68歲婦女的原發(fā)腫瘤建立；文獻(xiàn)中描述的細(xì)胞表達(dá)雄激素受體(據(jù)報(bào)道雄激素抑制細(xì)胞增殖)，但無雌激素受體；文獻(xiàn)中描述的細(xì)胞在裸鼠中是致瘤的。

細(xì)胞名稱

MFE-296人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞

細(xì)胞別稱

MFE 296; MFE296

細(xì)胞貨號

Delf-16712

來源

68 歲女性 子宮內(nèi)膜腺癌(G2級)

細(xì)胞形態(tài)

上皮樣多形性細(xì)胞

生長特性

單層貼壁生長

培養(yǎng)條件

準(zhǔn)備RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基和MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基按1:1配比，優(yōu)質(zhì)胎牛血清 20%,GlutaMAX-1谷氨酰胺1%, ITS（胰島素+轉(zhuǎn)鐵蛋白+硒） 1% ,P/S +1%,

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細(xì)胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
4、將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細(xì)胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定）

傳代方法

1、盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2、用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次，吸走潤洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化（1到2分鐘，難消化的細(xì)胞適當(dāng)增加時(shí)間）；
5、消化到細(xì)胞大部分變圓并脫落，輕敲培養(yǎng)瓶后加入3-4ml完培終止消化；
6、混勻細(xì)胞吸出，1000rpm離心3-5min，棄上清；補(bǔ)加1-2ml完培吹勻；
7、按1:2分配到新的培養(yǎng)瓶中，添加6-8ml完培保持細(xì)胞生長；

注意事項(xiàng)

不同品牌胰酶消化時(shí)間差別較大，可根據(jù)細(xì)胞形態(tài)判斷消化進(jìn)程

四、細(xì)胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配（推薦使用DELF無血清非程序細(xì)胞凍存液Delf-16090進(jìn)行凍存細(xì)胞，快速，便捷）。