一、細胞簡介

細胞簡介

MB49細胞來源于C57BL/Icrf-a(t)小鼠膀胱上皮細胞，該細胞在長期原代培養(yǎng)的第二天通過化學致癌物7, 12-二甲基四苯（DMBA；二甲基苯并蒽）單次24小時處理轉(zhuǎn)化。MB49細胞移植到同基因小鼠中會產(chǎn)生癌。MB49細胞雖然是雄性來源，但核型分析表明，所分析的細胞中100%的Y染色體丟失，這種異常是人類膀胱癌的常見早期培養(yǎng)事件。最近的一項研究表明，MB49細胞概括了膀胱腫瘤生長中性別差異的關(guān)鍵特征，在小鼠中植入MB49細胞發(fā)現(xiàn)雄性小鼠的腫瘤明顯大于雌性小鼠。在二氫睪酮的存在下，MB49細胞表現(xiàn)出劑量依賴的增殖增強。同時，MB49細胞對妊娠激素、人絨毛膜促性腺激素（hCG）無反應(yīng)。該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。

細胞名稱

MB49+luc 小鼠膀胱癌細胞穩(wěn)定表達熒光素酶

細胞別稱

MB49+luc；MB-49+luc

細胞貨號

Delf-16733

來源

C57BL/Icrf-a(t)；膀胱

細胞形態(tài)

上皮細胞樣

生長特性

貼壁生長

培養(yǎng)條件

DMEM培養(yǎng)基（貨號：Delf-16563）；優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%（貨號：Delf-11405）；

雙抗+1%（貨號：Delf-15487）。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含10%FBS）的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞；
4、將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法

1、盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2、用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次，吸走潤洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化（1到2分鐘，難消化的細胞適當增加時間）；
5、消化到細胞大部分變圓并脫落，輕敲培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的基礎(chǔ)培養(yǎng)基終止消化；
6、混勻細胞吸出，1000rpm離心3-5min，棄上清；補加1-2ml完培吹勻；
7、按1:2分配到新的培養(yǎng)瓶中，添加6-8ml完培保持細胞生長；

注意事項

1、該細胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細胞，隨細胞傳代次數(shù)的增加，其Luc熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。建議收到細胞后至少傳3代，凍存留種后再進行篩選。

2、初次進行細胞篩選時，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無細胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml。

3、若篩選過程中，漂浮細胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

四、細胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配（推薦使用DELF無血清非程序細胞凍存液Delf-16090進行凍存細胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細胞，計數(shù)，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml；
2、將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管；
3、將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

細胞培養(yǎng)清除試劑