一、細胞簡介

細胞簡介

該細胞系來源于患有 T 細胞淋巴母細胞淋巴瘤的 8 歲兒童惡性胸腔積液中收集的惡性細胞。這些細胞表達多種 T 譜系標記。細胞呈E玫瑰花結(jié)陰性，β2微球蛋白陽性。這些細胞對 Leu 5 (CD2)、綿羊紅細胞受體、OKT 9 (CD71；轉(zhuǎn)鐵蛋白受體)、表面免疫球蛋白 (sIg -)、HLA DR、CALLA (CD10) 和 Tac (CD25) 呈陰性。

細胞名稱

SUP-T1 人T淋巴瘤細胞

細胞別稱

Sup-T1; SUPT-1; SupT-1; Sup T-1; SUP T-1; SUP T1; Sup T1; SupT1; SUPT1; Tsup-1; VB; Stanford University Pediatric T-cell line 1

細胞貨號

Delf-28891

來源

8歲；男童；胸腔積液

細胞形態(tài)

淋巴母細胞樣

生長特性

懸浮生長

培養(yǎng)條件

1640培養(yǎng)基（貨號：Delf-16564）；優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%（貨號：Delf-11405）；

雙抗+1%（貨號：Delf-15487）。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含10%FBS）的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞；
4、將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細胞傳代方法（懸浮細胞）

傳代比例

1:2（不同細胞情況具體對待）

傳代方法

1、當細胞量達到 8-10×10⁵cell/ml 時，可進行傳代；

2、在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的細胞懸液至離心管中；

3、1000rpm 離心 5min，離心完成后，棄上清；

4、準備兩個新的T-25 培養(yǎng)瓶。向細胞沉淀加入完全培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細胞密度為2-4×10⁵cell/ml，均勻鋪于2個新的培養(yǎng)瓶中，每瓶約6-8ml；

5、水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO₂ 培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

注意事項

注意收集懸浮的細胞

四、細胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

凍存規(guī)格

建議每瓶T25瓶凍存1支。

凍存方法

1、待細胞生長狀態(tài)良好時，即可進行細胞凍存；

2、收集細胞懸液，計數(shù)；

3、1000rpm 離心 5min，離心完成后，棄上清；

4、加入細胞凍存液重懸細胞沉淀，調(diào)整細胞密度為2×10⁶ cell/ml，輕輕混勻后，將細胞懸液加入凍存管，1ml/支。

5、將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

6、次日取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存；

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

細胞培養(yǎng)清除試劑