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報告細胞系是指那些用報告基因標記的穩(wěn)定表達細胞系,可用于可視化、跟蹤和分離目的基因。報告細胞系可通過由目的基因的啟動子驅動的、帶有易檢測的標簽(如GFP)的外源表達來產(chǎn)生。然而,由于外源表達水平可能對實驗結果造成不可預知的影響,因此研究人員更傾向于具有內源表達報告基因。在這種情況下,通過將標簽(例如GFP)敲入到目的基因的啟動子下游來產(chǎn)生的報告細胞系是最佳的選擇。
報告分子可以是熒光蛋白和發(fā)光蛋白。如綠色熒光蛋白(GFP),當它暴露于藍色至紫外線范圍內的光時就會顯示亮綠色熒光;而熒光素酶(luciferase)則催化與熒光素的反應并產(chǎn)生光。在其他情況下,報告分子也可以是與目的基因融合的標簽,例如谷胱甘肽S-轉移酶(GST),組氨酸(HIS)和flag標簽。針對目的基因的產(chǎn)物,這些標簽可用于基于抗體的檢測和基于親和力的蛋白分離。
DELF提供了一系列在常用的細胞系中通過基因編輯產(chǎn)生的敲除細胞系(KO細胞系),如RAW 264.7小鼠巨噬細胞和THP-1人單核細胞。旨在提供簡單、快速和可靠的先天免疫特異性信號通路監(jiān)測。
我們的報告細胞穩(wěn)定表達一種或兩種報道蛋白,分泌的胚胎堿性磷酸酶(SEAP)和/或Lucia熒光素酶。
這兩種系統(tǒng)都具有分泌到細胞外的巨大優(yōu)勢,允許隨著時間的推移進行多次非破壞性讀取。
一、A549肺癌細胞是貼壁上皮細胞,通過人A549肺癌細胞系穩(wěn)定表達兩種可誘導的報道基因,目前DELF生物目前從事該細胞的基因編輯包含了對MAVS、MD a5、RIG-I等基因的敲除,穩(wěn)定過表達ACE2受體等。A549細胞系是哮喘、過敏和呼吸道感染的良好表征的細胞模型。
二、B16黑色素瘤細胞來源于C57BL/6來源的鼠B16黑色素瘤細胞系,在多聚ISRE增強的誘導型ISG54啟動子控制下,用SEAP報道基因穩(wěn)定轉染。目前DELF生物實驗室正在進行敲除STING基因對于信號通路的研究,以及通過監(jiān)測JAK/STAT通路的激活來檢測具有生物活性的鼠I型和II型干擾素。
三、HCT116細胞是貼壁上皮細胞,通過穩(wěn)定整合兩種可誘導的報道基因構建體而衍生自人HCT116結腸直腸癌細胞系。HCT116細胞表達一種分泌型胚胎堿性磷酸酶(SEAP)報告基因,該基因受與5個NF-κB和AP- 1結合位點融合的IL-12 p40最小啟動子控制。HCT116細胞也表達Luc熒光素酶編碼分泌型熒光素酶的基因。
四、HEK293胚胎腎癌穩(wěn)定表達功能性PRR基因或細胞因子受體基因的HEK293細胞是許多應用的有價值的工具,包括細胞內信號傳導的研究和新治療藥物的開發(fā)。
293/TLR Cells表達一種或兩種TLR和/或TLR相關基因的HEK 293細胞。293/TLR細胞HEK293細胞是否穩(wěn)定轉染了組成型表達一種或兩種人或小鼠來源的TLR和/或TLR相關基因的質粒。它們可以通過評估IL-8的產(chǎn)生或NF-κB的活化來確定配體刺激后的TLR活化。
更多報告細胞系的構建服務,可以點擊在線咨詢與我們聯(lián)系,利用自主開發(fā)的CRISPR系統(tǒng)修飾了數(shù)百種細胞系。CRISPR系統(tǒng)優(yōu)化了gRNA設計和靶向載體骨架。剪接和重組的效率遠高于傳統(tǒng)的CRISPR。目的基因的KO/報告基因的KI效率可達到傳統(tǒng)方法的10倍。
我們的優(yōu)勢
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