1對數(shù)生長期的細胞接種于培養(yǎng)瓶中，生長至70%～80%匯合時，將處于對數(shù)生長期的腫瘤細胞置于含有濃度的藥物濃度的培養(yǎng)液中培養(yǎng)

2棄去培養(yǎng)液，PBS清洗2遍，更換不含藥物培養(yǎng)基，常規(guī)培養(yǎng)

3待細胞恢復生長，培養(yǎng)一段時間后更換不含藥物的RPMI-1640（DMEM）胎牛血清培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)

4待細胞穩(wěn)定生長、進入對數(shù)生長期后，傳代兩次，再將篩選出的細胞在一定濃度的藥物濃度培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)依這樣不斷改變作用時間

5共經過1h、2h、3h、6h、12h、24h、36h、48h、60h、72h共10個作用時間段，約6到8個月的培養(yǎng)

6終使得細胞能夠在一定濃度的藥物的培養(yǎng)液中持續(xù)穩(wěn)定生長并傳代，然后脫藥培養(yǎng)1個月在檢測細胞的生物特性及耐藥指標

1采用藥物濃度遞增培養(yǎng)法沖擊誘導，對數(shù)生長期的細胞接種于培養(yǎng)瓶中

2細胞處于60～70%濃度對數(shù)期生長時，加入起始濃度為低濃度的藥物作用24h

3棄去培養(yǎng)液，PBS清洗2遍，更換不含藥物培養(yǎng)基

4細胞恢復生長后，消化傳代復以低濃度作用細胞24h，待細胞增殖至正常形態(tài)后，重復上述藥物沖擊，每種濃度沖擊8次。

5待細胞在此濃度穩(wěn)定生長后，提高藥物濃度繼續(xù)培養(yǎng)，藥物依次遞增濃度加藥。

6藥物誘導歷時大約6-9個月，直到細胞能夠在濃度的藥物中穩(wěn)定生長。