一鍵復(fù)制產(chǎn)品信息
產(chǎn)品推薦
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產(chǎn)品詳情
一、產(chǎn)品描述
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別名 |
NIB1; Ulp1; |
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蛋白及NCBI編號(hào) |
Q02724、 NM_001183834.1 |
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宿主 |
E.coli |
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表達(dá)區(qū)域 |
401-621aa |
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蛋白長(zhǎng)度 |
230aa（含標(biāo)簽） |
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蛋白序列 |
MKKLVPELNEKDDDQVQKALASRENTQLMNRDNIEITVRDFKTLAPRRWLNDTIIEFFMKYIEKSTPNTVAFNSFFYTNLSERGYQGVRRWMKRKKTQIDKLDKIF TPINLNQSHWALGIIDLKKKTIGYVDSLSNGPNAMSFAILTDLQKYVMEESKHTIGEDFDLIHLDCPQQPNGYDCGIYVCMNTLYGSADAPLDFDYKDAIRMRRFIA HLILTDALKLEHHHHHH |
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分子量 |
約26.9kDa |
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融合標(biāo)簽 |
6×His （C端） |
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純度 |
≥95% 蛋白電泳 |
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物理性狀 |
液態(tài)或凍干粉 |
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復(fù)溶 |
儲(chǔ)存液：推薦用PBS或者根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選定合適溶劑配成1mg/mL儲(chǔ)存液，分裝保存于-20℃。 工作液：客戶可根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求稀釋，現(xiàn)配現(xiàn)用。工作液配置后可以4℃放置2-3周。 |
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穩(wěn)定性 |
在-20℃/-80℃條件下，液態(tài)產(chǎn)品保存6個(gè)月，凍干產(chǎn)品保存12個(gè)月。 |
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應(yīng)用 |
抗體制備，免疫實(shí)驗(yàn)（ELISA，WB），切割融合蛋白N端的SUMO標(biāo)簽等。 |
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發(fā)貨周期 |
1-2周，現(xiàn)貨2-3天。 |
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實(shí)驗(yàn)效果圖
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12% Tris-Gly SDS-PAGE蛋白電泳圖 |
二、運(yùn)輸和儲(chǔ)存
2-8℃運(yùn)輸。從收到之日起，在-20℃至-80℃的無(wú)菌條件下保存。
三、背景信息
小分子泛素相關(guān)修飾蛋白（SUMO）是一類泛素相關(guān)的蛋白質(zhì)，通過(guò)結(jié)合賴氨酸側(cè)鏈來(lái)調(diào)節(jié)靶蛋白的功能。SUMO化是一個(gè)可逆的翻譯后修飾過(guò)程，在真核細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮著極其重要的作用，如轉(zhuǎn)錄、DNA修復(fù)、DNA重組、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白質(zhì)核轉(zhuǎn)質(zhì)運(yùn)輸和調(diào)節(jié)細(xì)胞周期等。
近年來(lái)，SUMO已經(jīng)成為一種有效的生物技術(shù)工具，通過(guò)SUMO與靶蛋白融合可以促進(jìn)蛋白質(zhì)折疊，增強(qiáng)蛋白質(zhì)的可溶性表達(dá)，保護(hù)蛋白質(zhì)免受蛋白酶水解，提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，已經(jīng)成功表達(dá)了FGF21、EGF、KGF2等。且SUMO融合蛋白可以被SUMO蛋白酶Ulp1特異性識(shí)別并切割，因此SUMO可以作為用于蛋白質(zhì)表達(dá)的理想標(biāo)簽。傳統(tǒng)的蛋白酶如factor Xa、煙草蝕刻病毒蛋白酶（TEV）、腸激酶和凝血酶等常用于標(biāo)簽的切除，但傳統(tǒng)蛋白酶識(shí)別特定的氨基酸序列，由于空間阻遏導(dǎo)致切割蛋白酶酶切效率不高。Ulp1與傳統(tǒng)的切割酶不同，Ulp1識(shí)別SUMO三級(jí)結(jié)構(gòu)，特異性的切割SUMO標(biāo)簽C端的異肽鍵。
迄今為止，已經(jīng)切開(kāi)了100種SUMO融合蛋白，未發(fā)現(xiàn)錯(cuò)誤的剪切。更重要的是，SUMO融合蛋白切割后，靶蛋白的Ｎ端不含有多余的氨基酸。對(duì)于醫(yī)藥蛋白，先決條件是僅含有天然氨基酸序列，因此SUMO作為融合標(biāo)簽對(duì)醫(yī)藥蛋白的表達(dá)及純化有重要的意義。
四、參考文獻(xiàn)
1. Christopher M. Hickey, et al. Function and Regulation of SUMO Proteases. Nat Rev Mol Cell Biol. 2012 Dec; 13(12): 755–766.
2. Marina Y.Linova, et al. A novel approach for production of an active N-terminally truncated Ulp1 (SUMO protease 1) catalytic domain from Escherichia coli inclusion bodies. Protein Expression and Purification
3. Rong Cai, et al. SUMO-specific Protease 1 Regulates Mitochondrial Biogenesis through PGC-1α*. CELL BIOLOGY. 2012, 287(53): P44464-44470
4.Zachary C Elmore, et al. Sumo-dependent substrate targeting of the SUMO protease Ulp1. 2011, BMC Biology ,9(74).
5. Xu, Z, et al. Molecular basis of the redox regulation of SUMO proteases: a protective mechanism of intermolecular disulfide linkage against irreversible sulfhydryl oxidation. 2008, FASEB J, 22: 127-137
6. during the last decade. Eur Cytokine Netw， 1996，7（2）：93-124.
常見(jiàn)問(wèn)題
答：公司提供兩種運(yùn)輸方式供老師選擇，1、復(fù)蘇的活細(xì)胞：采用常溫發(fā)貨的方式，收到即可觀察密度并判斷是否進(jìn)行傳代操作。優(yōu)勢(shì)是省去復(fù)蘇的步驟，細(xì)胞成活率較高。2、凍存的細(xì)胞：采用干冰運(yùn)輸，一般情況下發(fā)貨是2支凍存管，收到后放-80過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期存儲(chǔ)，擇機(jī)復(fù)蘇。優(yōu)勢(shì)是發(fā)貨快，一般一兩天即可收到，缺點(diǎn)是需要自己復(fù)蘇。
答：我公司提供的細(xì)胞大部分都參考資源庫(kù)的培養(yǎng)信息，如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺(tái)。也有少部分細(xì)胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案，根據(jù)客戶的意愿進(jìn)行選擇！
答：不可以重復(fù)使用，一般從我公司發(fā)出的細(xì)胞都需要達(dá)到一定的密度后發(fā)出，充液的培養(yǎng)基血清比例會(huì)比正常培養(yǎng)時(shí)所用到的培養(yǎng)液低很多，通常在3-5%，以維持細(xì)胞存活，控制生長(zhǎng)速度，不可以用來(lái)做細(xì)胞培養(yǎng)使用。
答：細(xì)胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點(diǎn)點(diǎn)，一般情況下是為貼壁的細(xì)胞或脫落的細(xì)胞死亡后的產(chǎn)物，懸浮細(xì)胞也會(huì)有這種現(xiàn)象，出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點(diǎn)。通常，白色的圓點(diǎn)是分散分布的，聚團(tuán)類的懸浮細(xì)胞可能會(huì)聚團(tuán)出現(xiàn)白色的亮斑，技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。
答：一般情況下，我公司建議客戶收到細(xì)胞后傳1-2代后即可安排凍存留種，可先凍存1-2支凍存管，凍存的細(xì)胞數(shù)量多一些，便于后期復(fù)蘇。購(gòu)買原代細(xì)胞的客戶，要充分考慮該細(xì)胞的傳代次數(shù)限制，人源原代細(xì)胞大概可以傳7代左右，鼠源的可以傳3代左右，對(duì)于一些能傳代次數(shù)很少的原代細(xì)胞，不建議凍存，收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實(shí)驗(yàn)。
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