一、細胞簡介

細胞簡介

293T/17細胞株是293T (293tsA1609neo)細胞株的衍生株。 293T 是293細胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉衍生株。 293T細胞進行克隆，檢測pBND和pZAP載體，得到一株能生成高滴度感染逆轉錄病毒的衍生株，293T/17。 細胞持續(xù)表達猿病毒40(SV40)大T抗原，而因其高轉染能力篩選到17號克隆。 293T/17細胞用pCRIPenv-和pCRIPgag-2載體轉染得到ANJOU 65 細胞株。 ANJOU 65細胞再用pCRIPgag-2 和 pGPT2E載體轉染得到親宅性外殼表達細胞株BOSC 23。ANJOU 65細胞用攜帶gpt抗性基因的pCRIPAMgag載體轉染得到Bing 雙向性表達包裝細胞株。

細胞名稱

293T/17 人胚腎細胞

細胞別稱

HEK-293T/17; HEK 293T/17; 293T/17

細胞貨號

Delf-17742

來源

人；胚胎腎

細胞形態(tài)

上皮細胞樣

生長特性

貼壁生長（貼壁不牢）

培養(yǎng)條件

DMEM培養(yǎng)基；優(yōu)質胎牛血清+10%；雙抗+1%。建議在完全培養(yǎng)基中添加（L-谷氨酰胺（2mM）+1%；NEAA+1%）

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細胞復蘇方法

復蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞；
4、將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細胞傳代方法（貼壁不牢）

傳代比例

1:2（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法

1、將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次；
2、PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中，注意收集PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化（1到2分鐘，難消化的細胞適當增加時間）；
5、消化到細胞大部分變圓并脫落，輕敲培養(yǎng)瓶后加入3-4ml完培終止消化；
6、混勻細胞吸出，1000rpm離心3-5min，棄上清；補加1-2ml完培吹勻；
7、按1:2分配到新的培養(yǎng)瓶中，添加6-8ml完培保持細胞生長；

注意事項

注意：

1.該細胞貼壁能力較弱，培養(yǎng)時可酌情使用預鋪0.2%明膠的培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿。在運輸過程中，細胞會漂浮聚團生長，收到細胞時同時收集懸浮細胞和貼壁細胞離心重懸后傳代培養(yǎng)。

2.如果發(fā)生293T/17細胞不貼壁，漂浮在培養(yǎng)基中的現象，可以酌情在培養(yǎng)基中添加（L-谷氨酰胺（2mM）1%；NEAA 1% ）以便正確緩沖培養(yǎng)基。促使懸浮細胞更好的存活以及細胞更容易貼壁。

四、細胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配（推薦使用DELF無血清非程序細胞凍存液Delf-16090進行凍存細胞，快速，便捷）。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細胞，計數，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml；
2、將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管；
3、將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存;

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產品僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用。