產(chǎn)品描述

種屬: 人源（Homo sapiens）

組織來源: 皮膚（Skin）

疾病: 2型糖尿病（Type 2 Diabetes）

年齡: 75歲（75 Years）

性別: 女（Female）

生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)（Adherent）

拆包 & 存儲(chǔ)

1. 請(qǐng)立即檢查包裝袋是否有破損或漏液

2. 請(qǐng)立即將細(xì)胞培養(yǎng)瓶從包裝盒中取出，并按照下方操作步驟進(jìn)行培養(yǎng)傳代

注意：如為凍存管，請(qǐng)收到后立即解凍培養(yǎng)。若來不及解凍，請(qǐng)儲(chǔ)存于液氮中（存儲(chǔ)于負(fù)80度，會(huì)降低細(xì)胞存活率）

細(xì)胞操作步驟

一、 鋪板

1. 提前一天在4℃冰箱中解凍干細(xì)胞鋪底工作液添加劑。

2. 用預(yù)冷的移液管將鋪底工作液添加劑和鋪底工作液基礎(chǔ)液按照1:9的比例混勻。

3. 將鋪底工作液覆蓋瓶底（6孔板1mL，依次類推），置于37℃培養(yǎng)箱過夜。

4. 使用前，用PBS洗滌一次。

注意：可根據(jù)試劑用量將鋪底工作液添加劑分裝保存-80℃，避免反復(fù)凍融。

二、 細(xì)胞復(fù)蘇

1. 首先開啟復(fù)蘇添加劑小瓶上的鋁蓋，并用酒精棉擦拭其表面，使用注射器吸取5mL復(fù)蘇基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入到瓶中，顛倒混勻。

2. 將復(fù)蘇添加劑和復(fù)蘇基礎(chǔ)液按照0.5mL：10mL的比例混勻，配置后的復(fù)蘇完全培養(yǎng)基保存4℃（可保存2周，可根據(jù)試劑用量將添加劑分裝保存于-80℃，避免反復(fù)凍融）。

3. 37℃水浴中，迅速解凍細(xì)胞，用酒精棉擦拭，轉(zhuǎn)移至無菌操作臺(tái)中。

4. 將細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移至含有5mL復(fù)蘇完全培養(yǎng)基的15mL離心管中200g離心5min。

5.棄上清，加入適量復(fù)蘇完全培養(yǎng)基，輕柔重懸細(xì)胞，接種到包被好的培養(yǎng)瓶中。

6. 水平十字搖勻，室溫放置15min.顯微鏡下觀察大部分細(xì)胞貼壁后，放入5%CO?的37℃培養(yǎng)箱中。

7. 培養(yǎng)24h后，棄掉復(fù)蘇完全培養(yǎng)基，加入新鮮的干細(xì)胞完全培養(yǎng)基（配置見下）

三、細(xì)胞傳代

1. 首先開啟干細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑小瓶上的鋁蓋，并用酒精棉擦拭其表面，使用注射器吸取5mL干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基加入到瓶中，顛倒混勻。（注意：可根據(jù)試劑用量將添加劑分裝保存于-80℃，避免反復(fù)凍融。）

2.將干細(xì)胞培養(yǎng)基添加劑和干細(xì)胞基礎(chǔ)液按照1mL：100mL的比例混勻，配置后的復(fù)蘇完全培養(yǎng)基保存4℃（可保存2周）。

3.將完全培養(yǎng)基平衡至室溫，取出包被過的培養(yǎng)皿，吸走包被液并加入適量完全培養(yǎng)基，置于37℃培養(yǎng)箱中預(yù)熱。

4.吸走細(xì)胞中上清并加入無鈣鎂PBS洗滌一次，加入適量干細(xì)胞消化液，37℃孵育4-6min,顯微鏡下大部分克隆邊緣開始脫落，克隆內(nèi)細(xì)胞間隙明顯則可。

5.吸去消化液，加入完全培養(yǎng)基，輕柔吹細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到新培養(yǎng)板中。

6.水平十字搖勻，室溫放置15min.顯微鏡下觀察大部分細(xì)胞貼壁后，放入5%CO?的37℃培養(yǎng)箱中。

傳代比例：建議 1:3 至 1:4 （以培養(yǎng)瓶底面積計(jì)算）

培養(yǎng)基換液: 每天換液。

完全培養(yǎng)基配制

該細(xì)胞系培養(yǎng)所用基本培養(yǎng)基為干細(xì)胞專用培養(yǎng)基。

使用范圍

本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。