一、細(xì)胞簡介

細(xì)胞簡介

該細(xì)胞來源于小鼠的正常氣管組織。

哮喘是一種常見的氣道慢性炎癥性疾病，目前我國有約 2000 萬人罹患哮喘。近些年，由于霧霾等空氣質(zhì)量與環(huán)境污染程度的日益惡劣，呼吸系統(tǒng)疾病也逐漸成為了全世界范圍影響人類健康最嚴(yán)重的慢性疾病之一，據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測，到2025年，世界上將會有 4 億人患上哮喘。哮喘發(fā)病癥狀眾多，早期表現(xiàn)為過敏性炎癥，后期由于氣管平滑肌增生，阻塞氣管，導(dǎo)致氣道狹窄、氣道高反應(yīng)及氣道重塑，患者出現(xiàn)胸悶、氣喘等癥狀，嚴(yán)重時危及生命。因此，對哮喘的發(fā)病機理與治療的研究是至關(guān)重要的。在對哮喘發(fā)病機制的研究中，氣管平滑肌是針對氣道阻塞性癥狀的主要研究目標(biāo)之一，針對氣管平滑肌細(xì)胞( airway smooth muscle cells，ASMCs) 的形態(tài)學(xué)觀察與細(xì)胞增殖速率的測量是在細(xì)胞生物學(xué)水平研究哮喘發(fā)病機制的常用手段。

細(xì)胞名稱

小鼠原代氣管平滑肌細(xì)胞

細(xì)胞別稱

Mouse primary tracheal smooth muscle cells

細(xì)胞貨號

Delf-11029

來源

小鼠；正常氣管

細(xì)胞形態(tài)

長梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞

生長特性

貼壁生長

培養(yǎng)條件

推薦使用DELF原代平滑肌細(xì)胞專用培養(yǎng)基來培養(yǎng)該細(xì)胞。

名稱

體積

濃度

保存條件

原代平滑肌細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基

500ml

1×

4℃、避光

原代平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)添加劑

5ml

100×

-20℃、避光

胎牛血清（FBS）

50ml

終濃度10%

-20℃、避光

雙抗（青霉素/鏈霉素，P/S）

5ml

100×

-20℃、避光

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細(xì)胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
4、將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細(xì)胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定）

傳代方法

1、盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2、用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次，吸走潤洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化（1到2分鐘，難消化的細(xì)胞適當(dāng)增加時間）；
5、消化到細(xì)胞大部分變圓并脫落，輕敲培養(yǎng)瓶后加入3-4ml完培終止消化；
6、混勻細(xì)胞吸出，1000rpm離心3-5min，棄上清；補加1-2ml完培吹勻；
7、按1:2分配到新的培養(yǎng)瓶中，添加6-8ml完培保持細(xì)胞生長；

注意事項

不同品牌胰酶消化時間差別較大，可根據(jù)細(xì)胞形態(tài)判斷消化進程

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。