一、細(xì)胞簡介

細(xì)胞簡介

該細(xì)胞來源于小鼠的正常冠狀動脈組織。

內(nèi)皮細(xì)胞層是血液和其它組織的天然屏障。內(nèi)皮細(xì)胞功能病變是造成動脈粥樣硬化的主要原因。內(nèi)皮細(xì)胞同時會合成和分泌凝血和纖維蛋白溶解系統(tǒng)的增強(qiáng)和抑制物，以及影響血小板粘附和聚集的媒介物。它們同時也會分泌控制細(xì)胞增殖的蛋白來維持血管壁的健康。人內(nèi)皮細(xì)胞會分泌t-PA和PAI-1等抗血栓因子以及響應(yīng)TNF-α，繼而分泌細(xì)胞因子GM-CSF，表達(dá)ICAM-1表面抗體，產(chǎn)生大量的一氧化氮和endothelin。經(jīng)皮冠狀動脈腔內(nèi)成形術(shù)（PTCA）造成的內(nèi)皮細(xì)胞受損和功能破壞可能是導(dǎo)致術(shù)后動脈再狹窄的重要原因。

細(xì)胞名稱

小鼠原代冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞

細(xì)胞別稱

Mouse primary coronary artery endothelial cells

細(xì)胞貨號

Delf-11044

來源

小鼠；正常冠狀動脈

細(xì)胞形態(tài)

上皮樣，多角形細(xì)胞

生長特性

貼壁生長

培養(yǎng)條件

推薦使用DELF原代內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基來培養(yǎng)該細(xì)胞。

名稱

體積

濃度

保存條件

原代內(nèi)皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基

500ml

1×

4℃、避光

原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)添加劑

5ml

100×

-20℃、避光

胎牛血清（FBS）

25mL

終濃度5%

-20℃、避光

雙抗（青霉素/鏈霉素，P/S）

5ml

100×

-20℃、避光

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

二、細(xì)胞復(fù)蘇方法

復(fù)蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
4、將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細(xì)胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定）

傳代方法

1、盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2、用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次，吸走潤洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化（1到2分鐘，難消化的細(xì)胞適當(dāng)增加時間）；
5、消化到細(xì)胞大部分變圓并脫落，輕敲培養(yǎng)瓶后加入3-4ml完培終止消化；
6、混勻細(xì)胞吸出，1000rpm離心3-5min，棄上清；補(bǔ)加1-2ml完培吹勻；
7、按1:2分配到新的培養(yǎng)瓶中，添加6-8ml完培保持細(xì)胞生長；

注意事項

不同品牌胰酶消化時間差別較大，可根據(jù)細(xì)胞形態(tài)判斷消化進(jìn)程

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。