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      產(chǎn)品詳情

      規(guī)格: 100mL          

      儲(chǔ)存條件:2 ~ 8 ℃

      產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

      iPS細(xì)胞消化液可以應(yīng)用于非飼養(yǎng)層依賴的iPS傳代,該工作液屬于非酶類溫和消化液,對(duì)細(xì)胞損傷小且消化時(shí)間適中便于操作,是一種已被普遍使用的消化液,可與iPS培養(yǎng)基搭配使用。


      操作說(shuō)明:

      1. 消化前,準(zhǔn)備 37 ℃預(yù)熱好的無(wú)鈣鎂PBS 溶液及消化液,完全培養(yǎng)基。

      2. 吸走上清,并加入37℃預(yù)熱好的PBS 溶液清洗1次。

      3. 加入適量( 6 孔板每孔加 1mL,6cm 皿加 2mL,10cm 皿加 3mL 的量) 37℃預(yù)熱好的消化液。

      4. 37℃放置1-2min,用手指輕彈皿/板/瓶身,顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開(kāi)始脫離培養(yǎng)皿/板底,克隆內(nèi)部大部分細(xì)胞成團(tuán)脫落。

      5. 加入適量的完全培養(yǎng)基終止消化。

      6. 移入離心管,300g離心5min。

      7. 吸出培養(yǎng)基,確保細(xì)胞團(tuán)完整。

      8. 然后緩慢加入1mL完全培養(yǎng)基,用手指輕彈離心管底部,使細(xì)胞團(tuán)脫離底部并分散。

      9. 傳代比例為 1:6—1:8,根據(jù)最終培養(yǎng)細(xì)胞的液體體積,加入ROCK inhibitor Y27632,終濃度為10μM。

      10. 將培養(yǎng)皿/板/瓶置于37℃培養(yǎng)箱中,每天更換培養(yǎng)基(換液不需要再添加Y27632,但培養(yǎng)基需提前預(yù)熱)。

       

      注:

      1.吹吸的力度要輕柔,吹打脫落和吹吸混勻的次數(shù)總共不超過(guò)10次為宜。吹打過(guò)度導(dǎo)致大量單細(xì)胞出現(xiàn)是造成細(xì)胞分化或死亡的重要原因。

      2.若有少量細(xì)胞無(wú)法從皿底脫落,屬于正常現(xiàn)象,需延長(zhǎng)消化時(shí)間。

      常見(jiàn)問(wèn)題
      問(wèn):細(xì)胞的運(yùn)輸方式有哪些?有什么區(qū)別?

      答:公司提供兩種運(yùn)輸方式供老師選擇,1、復(fù)蘇的活細(xì)胞:采用常溫發(fā)貨的方式,收到即可觀察密度并判斷是否進(jìn)行傳代操作。優(yōu)勢(shì)是省去復(fù)蘇的步驟,細(xì)胞成活率較高。2、凍存的細(xì)胞:采用干冰運(yùn)輸,一般情況下發(fā)貨是2支凍存管,收到后放-80過(guò)夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期存儲(chǔ),擇機(jī)復(fù)蘇。優(yōu)勢(shì)是發(fā)貨快,一般一兩天即可收到,缺點(diǎn)是需要自己復(fù)蘇。

      問(wèn):為什么你們的細(xì)胞和其他公司的細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣?

      答:我公司提供的細(xì)胞大部分都參考資源庫(kù)的培養(yǎng)信息,如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺(tái)。也有少部分細(xì)胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案,根據(jù)客戶的意愿進(jìn)行選擇!

      問(wèn):培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液可以重復(fù)使用嗎?

      答:不可以重復(fù)使用,一般從我公司發(fā)出的細(xì)胞都需要達(dá)到一定的密度后發(fā)出,充液的培養(yǎng)基血清比例會(huì)比正常培養(yǎng)時(shí)所用到的培養(yǎng)液低很多,通常在3-5%,以維持細(xì)胞存活,控制生長(zhǎng)速度,不可以用來(lái)做細(xì)胞培養(yǎng)使用。

      問(wèn):培養(yǎng)細(xì)胞在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有一些白色的圓點(diǎn)是什么?

      答:細(xì)胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點(diǎn)點(diǎn),一般情況下是為貼壁的細(xì)胞或脫落的細(xì)胞死亡后的產(chǎn)物,懸浮細(xì)胞也會(huì)有這種現(xiàn)象,出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點(diǎn)。通常,白色的圓點(diǎn)是分散分布的,聚團(tuán)類的懸浮細(xì)胞可能會(huì)聚團(tuán)出現(xiàn)白色的亮斑,技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。

      問(wèn):剛買回來(lái)的細(xì)胞如何凍存留種呢?

      答:一般情況下,我公司建議客戶收到細(xì)胞后傳1-2代后即可安排凍存留種,可先凍存1-2支凍存管,凍存的細(xì)胞數(shù)量多一些,便于后期復(fù)蘇。購(gòu)買原代細(xì)胞的客戶,要充分考慮該細(xì)胞的傳代次數(shù)限制,人源原代細(xì)胞大概可以傳7代左右,鼠源的可以傳3代左右,對(duì)于一些能傳代次數(shù)很少的原代細(xì)胞,不建議凍存,收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實(shí)驗(yàn)。

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