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ArcticExpress (DE3) 感受態(tài)細(xì)胞

目錄價 ￥ 0.00 一鍵復(fù)制產(chǎn)品信息

別稱ArcticExpress (DE3) Chemically Competent Cell

貨號Delf-24615

規(guī)格 1×10?/T25培養(yǎng)瓶

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產(chǎn)品詳情

保存條件： -80℃

基因型

E.coli B F– ompT hsdS(rB– mB–) dcm+

TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR]

簡要說明

ArcticExpress (DE3)來源于E. coli B，為Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株，可促進(jìn)表達(dá)蛋白的穩(wěn)定。ArcticExpress (DE3)菌株染色體DNA中整合了λ噬菌體DE3區(qū)，使得ArcticExpress (DE3)菌株可同時表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，廣泛用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。ArcticExpress (DE3) 菌株具有四環(huán)素，慶大霉素抗性，endA1突變有利于質(zhì)粒DNA的穩(wěn)定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使ArcticExpress (DE3)可以表達(dá)適應(yīng)低溫的伴侶蛋白Cpn10和Cpn60（來自嗜冷菌—Oleispira antarctica）。

Cpn10和Cpn60伴侶蛋白在4-12℃表現(xiàn)出較高活性，在ArcticExpress (DE3)細(xì)胞中表達(dá)時，可降低重組蛋白包涵體的形成，增加可溶重組蛋白的表達(dá)量及生物活性，比傳統(tǒng)的原核表達(dá)伴侶蛋白GroEL、GroES等具有更加優(yōu)異的促融性能。ArcticExpress (DE3)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)108cfu/μg DNA。

操作說明

1. ArcticExpress (DE3) 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒，并用手撥打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌LB培養(yǎng)基，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上（平板中務(wù)必同時含有34μg/ml的氯霉素，40μg/ml的慶大霉素和轉(zhuǎn)化質(zhì)粒本身的篩選抗生素；若質(zhì)粒濃度較高，也可稀釋后涂板，務(wù)必保證能在平板上挑到單克隆菌落）。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

注意事項

1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無抗生素外，其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有40ug/ml的慶大霉素，以防質(zhì)粒丟失。

3. 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導(dǎo)時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。

4. ArcticExpress (DE3)感受態(tài)細(xì)胞具有四環(huán)素、慶大霉素抗性，不可用于具有四環(huán)素、慶大霉素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。

STR鑒定

STR位點信息

操作流程

細(xì)胞復(fù)蘇、傳代與凍存操作流程下載

細(xì)胞服務(wù)告知書文檔下載

常見問題

問：細(xì)胞的運(yùn)輸方式有哪些？有什么區(qū)別？

答：公司提供兩種運(yùn)輸方式供老師選擇，1、復(fù)蘇的活細(xì)胞：采用常溫發(fā)貨的方式，收到即可觀察密度并判斷是否進(jìn)行傳代操作。優(yōu)勢是省去復(fù)蘇的步驟，細(xì)胞成活率較高。2、凍存的細(xì)胞：采用干冰運(yùn)輸，一般情況下發(fā)貨是2支凍存管，收到后放-80過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮長期存儲，擇機(jī)復(fù)蘇。優(yōu)勢是發(fā)貨快，一般一兩天即可收到，缺點是需要自己復(fù)蘇。

問：為什么你們的細(xì)胞和其他公司的細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣？

答：我公司提供的細(xì)胞大部分都參考資源庫的培養(yǎng)信息，如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺。也有少部分細(xì)胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案，根據(jù)客戶的意愿進(jìn)行選擇！

問：培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液可以重復(fù)使用嗎？

答：不可以重復(fù)使用，一般從我公司發(fā)出的細(xì)胞都需要達(dá)到一定的密度后發(fā)出，充液的培養(yǎng)基血清比例會比正常培養(yǎng)時所用到的培養(yǎng)液低很多，通常在3-5%，以維持細(xì)胞存活，控制生長速度，不可以用來做細(xì)胞培養(yǎng)使用。

問：培養(yǎng)細(xì)胞在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有一些白色的圓點是什么？

答：細(xì)胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點點，一般情況下是為貼壁的細(xì)胞或脫落的細(xì)胞死亡后的產(chǎn)物，懸浮細(xì)胞也會有這種現(xiàn)象，出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點。通常，白色的圓點是分散分布的，聚團(tuán)類的懸浮細(xì)胞可能會聚團(tuán)出現(xiàn)白色的亮斑，技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。

問：剛買回來的細(xì)胞如何凍存留種呢？

答：一般情況下，我公司建議客戶收到細(xì)胞后傳1-2代后即可安排凍存留種，可先凍存1-2支凍存管，凍存的細(xì)胞數(shù)量多一些，便于后期復(fù)蘇。購買原代細(xì)胞的客戶，要充分考慮該細(xì)胞的傳代次數(shù)限制，人源原代細(xì)胞大概可以傳7代左右，鼠源的可以傳3代左右，對于一些能傳代次數(shù)很少的原代細(xì)胞，不建議凍存，收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實驗。