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TTC染色

TTC染色，服務(wù)介紹：2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazoliumchloride，TTC)，分子量為334.80，分子式為C19H15CIN4，CAS號為298-96-4,TTC是脂溶性光敏感復(fù)合物，最初用于檢測種子生存能力，后來用于染色檢測哺乳動物組織的缺血梗塞。實驗原理：TTC是呼吸鏈中吡啶核苷結(jié)合酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體，由于各種脫氫酶的活性，白色化合物在活組織中被酶促還......

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產(chǎn)品詳情

服務(wù)介紹：

2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride，TTC)，分子量為334.80，分子式為C19H15CIN4，CAS號為298-96-4,TTC是脂溶性光敏感復(fù)合物，最初用于檢測種子生存能力，后來用于染色檢測哺乳動物組織的缺血梗塞。

實驗原理：

TTC是呼吸鏈中吡啶核苷結(jié)合酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體，由于各種脫氫酶的活性，白色化合物在活組織中被酶促還原為紅色TPF（1,3,5-三苯基甲臜），而在壞死區(qū)域，這些酶已經(jīng)變性或降解，因此在壞死區(qū)域保持白色，該染色是一種用于評價組織內(nèi)脫氫酶活性的大體染色方法。

實驗步驟

1、取材：動物麻醉后立即取新鮮組織（如腦、心臟），不經(jīng)固定液固定，將組織直接放入OCT包埋劑-20℃速凍30min，如果不急用，可以暫時放置-80℃凍存。

2、組織塊切片：將凍好的組織稍解凍，用萊卡新刀片手動切片，厚度2-3mm為宜，切面整齊。

3、TTC染色：將切片放入提前37℃預(yù)熱好的的TTC孵育液中，放入37℃水浴鍋中避光孵育 30min，間隔10min輕輕搖動組織，使其均勻接觸到染色液，并觀察染色結(jié)果。

4、拍照：組織成色后，加入固定液終止反應(yīng)，并避光保存組織，照相機拍照。

送樣運輸要求：

新鮮組織， -80℃運輸

常見問題

問：細胞的運輸方式有哪些？有什么區(qū)別？

答：公司提供兩種運輸方式供老師選擇，1、復(fù)蘇的活細胞：采用常溫發(fā)貨的方式，收到即可觀察密度并判斷是否進行傳代操作。優(yōu)勢是省去復(fù)蘇的步驟，細胞成活率較高。2、凍存的細胞：采用干冰運輸，一般情況下發(fā)貨是2支凍存管，收到后放-80過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮長期存儲，擇機復(fù)蘇。優(yōu)勢是發(fā)貨快，一般一兩天即可收到，缺點是需要自己復(fù)蘇。

問：為什么你們的細胞和其他公司的細胞培養(yǎng)條件不一樣？

答：我公司提供的細胞大部分都參考資源庫的培養(yǎng)信息，如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺。也有少部分細胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案，根據(jù)客戶的意愿進行選擇！

問：培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液可以重復(fù)使用嗎？

答：不可以重復(fù)使用，一般從我公司發(fā)出的細胞都需要達到一定的密度后發(fā)出，充液的培養(yǎng)基血清比例會比正常培養(yǎng)時所用到的培養(yǎng)液低很多，通常在3-5%，以維持細胞存活，控制生長速度，不可以用來做細胞培養(yǎng)使用。

問：培養(yǎng)細胞在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有一些白色的圓點是什么？

答：細胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點點，一般情況下是為貼壁的細胞或脫落的細胞死亡后的產(chǎn)物，懸浮細胞也會有這種現(xiàn)象，出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點。通常，白色的圓點是分散分布的，聚團類的懸浮細胞可能會聚團出現(xiàn)白色的亮斑，技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。

問：剛買回來的細胞如何凍存留種呢？

答：一般情況下，我公司建議客戶收到細胞后傳1-2代后即可安排凍存留種，可先凍存1-2支凍存管，凍存的細胞數(shù)量多一些，便于后期復(fù)蘇。購買原代細胞的客戶，要充分考慮該細胞的傳代次數(shù)限制，人源原代細胞大概可以傳7代左右，鼠源的可以傳3代左右，對于一些能傳代次數(shù)很少的原代細胞，不建議凍存，收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實驗。