視網(wǎng)膜血管網(wǎng)鋪片PAS染色
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產(chǎn)品詳情
服務介紹:
視網(wǎng)膜血管網(wǎng)鋪片是研究糖尿病視網(wǎng)膜病變 (diabetic retinopathy,DR)的金標準之一,可以定性、定量地評估視網(wǎng)膜血管形態(tài),包括血管走行、面積分布和管壁細胞結(jié)構(gòu),更直觀地了解DR微血管的病變情況。
實驗原理:
單獨剝?nèi)⊙矍蛞暰W(wǎng)膜,用胰酶消化去除視網(wǎng)膜內(nèi)細胞只保留血管網(wǎng),將血管網(wǎng)均勻地鋪在載玻片上進行PAS染色。PAS染色又稱過碘酸雪夫染色。一般用來顯示糖原和其它多糖物質(zhì)。過碘酸能使細胞內(nèi)的多糖乙二醇基氧化成二醛,再與Schiff氏液的無色品紅結(jié)合呈現(xiàn)紫紅色,復染蘇木素,細胞核呈藍色。毛細血管基底膜含有大量糖類物質(zhì),經(jīng)PAS染色后呈現(xiàn)紫紅色,進而將血管網(wǎng)的形態(tài)結(jié)構(gòu)染出來。
結(jié)果判讀:
視網(wǎng)膜毛細血管呈紫紅色,細胞核呈藍色。閉鎖毛細血管細胞核消失,且管腔萎縮變細呈細線狀。
樣本的保存運輸條件及注意事項:
1)整顆眼球4%PFA固定24h以上,常溫保存運輸。
2)固定樣本一個月內(nèi)送樣檢測,固定時間過長,制片效果不佳。
常見問題
答:公司提供兩種運輸方式供老師選擇,1、復蘇的活細胞:采用常溫發(fā)貨的方式,收到即可觀察密度并判斷是否進行傳代操作。優(yōu)勢是省去復蘇的步驟,細胞成活率較高。2、凍存的細胞:采用干冰運輸,一般情況下發(fā)貨是2支凍存管,收到后放-80過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮長期存儲,擇機復蘇。優(yōu)勢是發(fā)貨快,一般一兩天即可收到,缺點是需要自己復蘇。
答:我公司提供的細胞大部分都參考資源庫的培養(yǎng)信息,如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺。也有少部分細胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案,根據(jù)客戶的意愿進行選擇!
答:不可以重復使用,一般從我公司發(fā)出的細胞都需要達到一定的密度后發(fā)出,充液的培養(yǎng)基血清比例會比正常培養(yǎng)時所用到的培養(yǎng)液低很多,通常在3-5%,以維持細胞存活,控制生長速度,不可以用來做細胞培養(yǎng)使用。
答:細胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點點,一般情況下是為貼壁的細胞或脫落的細胞死亡后的產(chǎn)物,懸浮細胞也會有這種現(xiàn)象,出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點。通常,白色的圓點是分散分布的,聚團類的懸浮細胞可能會聚團出現(xiàn)白色的亮斑,技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。
答:一般情況下,我公司建議客戶收到細胞后傳1-2代后即可安排凍存留種,可先凍存1-2支凍存管,凍存的細胞數(shù)量多一些,便于后期復蘇。購買原代細胞的客戶,要充分考慮該細胞的傳代次數(shù)限制,人源原代細胞大概可以傳7代左右,鼠源的可以傳3代左右,對于一些能傳代次數(shù)很少的原代細胞,不建議凍存,收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實驗。














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