原位雜交(FISH、IF、IF三染)
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一鍵復(fù)制產(chǎn)品信息
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聯(lián)系方式
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- 郵箱:355185756@qq.com
- 地址:安徽省合肥市高新區(qū)黃山路602號合肥國家大學(xué)科技園A401室
產(chǎn)品詳情
服務(wù)介紹:
原位雜交與免疫熒光原理:原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知序列核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。免疫熒光就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體或抗原上,與其相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后,在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。
通過原位雜交及免疫熒光雙抗進(jìn)行三標(biāo),可以在組織細(xì)胞中對核酸分子和蛋白指標(biāo)同時進(jìn)行共定位、以及定性分析,可以用來從共定位角度提示核酸和蛋白存在相互作用。
實驗流程:石蠟切片熒光探針原位雜交與免疫熒光雙抗三染實驗步驟
1、組織固定、脫水、切片、石蠟切片脫蠟至水。
2、消化:切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘,滴加蛋白酶K消化。
3、預(yù)雜交:滴加預(yù)雜交液,37°C孵育1h。
4、雜交:傾去預(yù)雜交液,滴加含探針 雜交液, 濃度 ,恒溫箱 度雜交過夜。
5、雜交后洗滌:SSC洗滌。
6、孵育一抗、二抗:滴加一抗,4℃過夜,后PBS洗3×5min;滴加相應(yīng)二抗,室溫孵育50min,PBS洗3×5min。
7、DAPI復(fù)染核:切片滴加DAPI染液,避光孵育8min。
8、鏡檢拍照。
送樣要求:
1、切片前處理要求:新鮮組織干冰運輸后做冰凍切片;或取2mm左右厚度的新鮮組織,5min內(nèi)投入原位雜交固定液內(nèi)固定,4℃低溫保存運輸,切勿冷凍結(jié)冰,盡快包埋切片后進(jìn)行原位雜交實驗,固定時間過長影響核酸檢出率;
2、冰凍切片:冰凍切片-20℃運輸;
3、石蠟切片:石蠟切片常溫運輸;
4、細(xì)胞爬片:細(xì)胞爬片加原位雜交固定液固定15min后,換無酶PBS,密封,4℃運輸。
常見問題
答:公司提供兩種運輸方式供老師選擇,1、復(fù)蘇的活細(xì)胞:采用常溫發(fā)貨的方式,收到即可觀察密度并判斷是否進(jìn)行傳代操作。優(yōu)勢是省去復(fù)蘇的步驟,細(xì)胞成活率較高。2、凍存的細(xì)胞:采用干冰運輸,一般情況下發(fā)貨是2支凍存管,收到后放-80過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮長期存儲,擇機(jī)復(fù)蘇。優(yōu)勢是發(fā)貨快,一般一兩天即可收到,缺點是需要自己復(fù)蘇。
答:我公司提供的細(xì)胞大部分都參考資源庫的培養(yǎng)信息,如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺。也有少部分細(xì)胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案,根據(jù)客戶的意愿進(jìn)行選擇!
答:不可以重復(fù)使用,一般從我公司發(fā)出的細(xì)胞都需要達(dá)到一定的密度后發(fā)出,充液的培養(yǎng)基血清比例會比正常培養(yǎng)時所用到的培養(yǎng)液低很多,通常在3-5%,以維持細(xì)胞存活,控制生長速度,不可以用來做細(xì)胞培養(yǎng)使用。
答:細(xì)胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點點,一般情況下是為貼壁的細(xì)胞或脫落的細(xì)胞死亡后的產(chǎn)物,懸浮細(xì)胞也會有這種現(xiàn)象,出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點。通常,白色的圓點是分散分布的,聚團(tuán)類的懸浮細(xì)胞可能會聚團(tuán)出現(xiàn)白色的亮斑,技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。
答:一般情況下,我公司建議客戶收到細(xì)胞后傳1-2代后即可安排凍存留種,可先凍存1-2支凍存管,凍存的細(xì)胞數(shù)量多一些,便于后期復(fù)蘇。購買原代細(xì)胞的客戶,要充分考慮該細(xì)胞的傳代次數(shù)限制,人源原代細(xì)胞大概可以傳7代左右,鼠源的可以傳3代左右,對于一些能傳代次數(shù)很少的原代細(xì)胞,不建議凍存,收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實驗。















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