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探針設(shè)計(jì)合成-2OD（兩端標(biāo)記、DIG）

探針設(shè)計(jì)合成-2OD（兩端標(biāo)記、DIG），服務(wù)介紹：根據(jù)提供的基因序列，采用寡核苷酸設(shè)計(jì)軟件，設(shè)計(jì)出候補(bǔ)探針序列，經(jīng)數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)后，判斷特異性合格后，按序列合成出對(duì)應(yīng)的核酸序列并標(biāo)記特定的標(biāo)記物.以上探針為cDNA寡核苷酸探針，若合成RNA額外增加1000元。實(shí)驗(yàn)流程：1、設(shè)計(jì)：設(shè)計(jì)具有特異性的探針序列2、合成：采用固相亞磷酰胺三酯法，經(jīng)過(guò)四步循環(huán)反應(yīng)：脫保護(hù)、耦連、加帽、氧化，逐一將一個(gè)一個(gè)核苷酸單體連接在3’固相載體上,在過(guò)程中將修飾標(biāo)......

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服務(wù)介紹：

根據(jù)提供的基因序列，采用寡核苷酸設(shè)計(jì)軟件，設(shè)計(jì)出候補(bǔ)探針序列，經(jīng)數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)后，判斷特異性合格后，按序列合成出對(duì)應(yīng)的核酸序列并標(biāo)記特定的標(biāo)記物.

以上探針為cDNA寡核苷酸探針，若合成RNA額外增加1000元。

實(shí)驗(yàn)流程：

1、設(shè)計(jì)：設(shè)計(jì)具有特異性的探針序列

2、合成：采用固相亞磷酰胺三酯法，經(jīng)過(guò)四步循環(huán)反應(yīng)：脫保護(hù)、耦連、加帽、氧化，逐一將一個(gè)一個(gè)核苷酸單體連接在3’固相載體上,在過(guò)程中將修飾標(biāo)記在相應(yīng)位置。

3、氨解：將合成好的寡聚核苷酸從固體載體(CPG)上化學(xué)切割下來(lái)，經(jīng)氨解脫去保護(hù)基團(tuán)。

4、純化：粗品質(zhì)檢合格后，對(duì)粗品進(jìn)行HPLC純化，通過(guò)分離度不同分離雜質(zhì)，制備出目標(biāo)產(chǎn)物純品。

5、質(zhì)檢：利用LTQ-MS質(zhì)譜儀對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物純品進(jìn)行檢測(cè)。

6、定量分裝：利用酶標(biāo)儀對(duì)合格純品進(jìn)行A260定量分裝，然后用真空干燥機(jī)抽干樣品至呈干粉狀。

送樣運(yùn)輸要求：干粉狀態(tài)4度運(yùn)輸。液體狀態(tài)-20度運(yùn)輸

常見(jiàn)問(wèn)題

問(wèn)：細(xì)胞的運(yùn)輸方式有哪些？有什么區(qū)別？

答：公司提供兩種運(yùn)輸方式供老師選擇，1、復(fù)蘇的活細(xì)胞：采用常溫發(fā)貨的方式，收到即可觀察密度并判斷是否進(jìn)行傳代操作。優(yōu)勢(shì)是省去復(fù)蘇的步驟，細(xì)胞成活率較高。2、凍存的細(xì)胞：采用干冰運(yùn)輸，一般情況下發(fā)貨是2支凍存管，收到后放-80過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期存儲(chǔ)，擇機(jī)復(fù)蘇。優(yōu)勢(shì)是發(fā)貨快，一般一兩天即可收到，缺點(diǎn)是需要自己復(fù)蘇。

問(wèn)：為什么你們的細(xì)胞和其他公司的細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣？

答：我公司提供的細(xì)胞大部分都參考資源庫(kù)的培養(yǎng)信息，如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺(tái)。也有少部分細(xì)胞為客戶提供了替代培養(yǎng)方案，根據(jù)客戶的意愿進(jìn)行選擇！

問(wèn)：培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液可以重復(fù)使用嗎？

答：不可以重復(fù)使用，一般從我公司發(fā)出的細(xì)胞都需要達(dá)到一定的密度后發(fā)出，充液的培養(yǎng)基血清比例會(huì)比正常培養(yǎng)時(shí)所用到的培養(yǎng)液低很多，通常在3-5%，以維持細(xì)胞存活，控制生長(zhǎng)速度，不可以用來(lái)做細(xì)胞培養(yǎng)使用。

問(wèn)：培養(yǎng)細(xì)胞在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有一些白色的圓點(diǎn)是什么？

答：細(xì)胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點(diǎn)點(diǎn)，一般情況下是為貼壁的細(xì)胞或脫落的細(xì)胞死亡后的產(chǎn)物，懸浮細(xì)胞也會(huì)有這種現(xiàn)象，出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點(diǎn)。通常，白色的圓點(diǎn)是分散分布的，聚團(tuán)類(lèi)的懸浮細(xì)胞可能會(huì)聚團(tuán)出現(xiàn)白色的亮斑，技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。

問(wèn)：剛買(mǎi)回來(lái)的細(xì)胞如何凍存留種呢？

答：一般情況下，我公司建議客戶收到細(xì)胞后傳1-2代后即可安排凍存留種，可先凍存1-2支凍存管，凍存的細(xì)胞數(shù)量多一些，便于后期復(fù)蘇。購(gòu)買(mǎi)原代細(xì)胞的客戶，要充分考慮該細(xì)胞的傳代次數(shù)限制，人源原代細(xì)胞大概可以傳7代左右，鼠源的可以傳3代左右，對(duì)于一些能傳代次數(shù)很少的原代細(xì)胞，不建議凍存，收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實(shí)驗(yàn)。