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實(shí)時(shí)熒光定量PCR （qPCR）

實(shí)時(shí)熒光定量PCR （qPCR），實(shí)時(shí)熒光定量PCR：指在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，熒光信號(hào)被收集，轉(zhuǎn)化成為擴(kuò)增和熔解曲線，以實(shí)現(xiàn)對(duì)PCR進(jìn)程進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，具體提供數(shù)據(jù)是基線，熒光閾值和Ct值。實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）檢測(cè)流程圖我們的優(yōu)勢(shì)：1、高環(huán)評(píng)、標(biāo)準(zhǔn)化、開(kāi)放式實(shí)驗(yàn)室，客戶(hù)可全程跟蹤實(shí)驗(yàn)；2、購(gòu)有熱循環(huán)儀、PCR儀等先進(jìn)整套儀器設(shè)備；3、標(biāo)準(zhǔn)的SOP操作規(guī)程，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)、客觀、可靠！4、SYBRGreen法和TaqMan探......

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安徽省合肥市高新區(qū)黃山路602號(hào)合肥國(guó)家大學(xué)科技園A401室

產(chǎn)品詳情

實(shí)時(shí)熒光定量PCR：指在 PCR 擴(kuò)增過(guò)程中，熒光信號(hào)被收集，轉(zhuǎn)化成為擴(kuò)增和熔解曲線，以實(shí)現(xiàn)對(duì) PCR 進(jìn)程進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)，具體提供數(shù)據(jù)是基線，熒光閾值和 Ct 值。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR （qPCR）檢測(cè)流程圖

我們的優(yōu)勢(shì)：

1、高環(huán)評(píng)、標(biāo)準(zhǔn)化、開(kāi)放式實(shí)驗(yàn)室，客戶(hù)可全程跟蹤實(shí)驗(yàn)；

2、購(gòu)有熱循環(huán)儀、PCR儀等先進(jìn)整套儀器設(shè)備；

3、標(biāo)準(zhǔn)的SOP操作規(guī)程，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)、客觀、可靠！

4、SYBR Green 法和TaqMan探針?lè)ǘ伎山訂危?

服務(wù)周期:

1、RNA提取 1-2工作日

2、反轉(zhuǎn)錄mRNA/lncRNA 1-2工作日

3、反轉(zhuǎn)錄miRNA 1-2工作日

4、引物設(shè)計(jì)與合成含質(zhì)檢 5-7工作日

5、qPCR檢測(cè) 2-3工作日

樣本準(zhǔn)備要求

細(xì)胞樣本：細(xì)胞處理結(jié)束后，去除培養(yǎng)液收集細(xì)胞沉淀，每1*10^6個(gè)細(xì)胞量加入1ml trizol試劑，反復(fù)吹打，使細(xì)胞和trizol試劑充分接觸并呈現(xiàn)清亮不粘稠狀態(tài)，液氮速凍保存于-80℃干冰運(yùn)輸。

組織樣本：動(dòng)物冰上取材1cm3大小，立即放入預(yù)冷裝有1ml trizol的無(wú)RNA酶的EP管中，液氮速凍保存于-80℃冰箱，干冰運(yùn)輸。

全血樣本：全血采集于肝素鈉抗凝管中，加入等體積的1×PBS充分混勻，參照淋巴細(xì)胞分離說(shuō)明書(shū)分離淋巴細(xì)胞，去上清收集白細(xì)胞，加入白細(xì)胞體積20倍的trizol試劑，反復(fù)吹打，使細(xì)胞和trizol試劑充分接觸并呈現(xiàn)清亮不粘稠狀態(tài)，液氮速凍保存于-80℃干冰運(yùn)輸。若需要本公司提取白細(xì)胞，全血需1h-2h內(nèi)送達(dá)本公司。

交付標(biāo)準(zhǔn)：

1.完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告一份（包括所用到試劑耗材、儀器設(shè)備、操作步驟、原始數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果）。

2.剩余的樣本和試劑

常見(jiàn)問(wèn)題

問(wèn)：細(xì)胞的運(yùn)輸方式有哪些？有什么區(qū)別？

答：公司提供兩種運(yùn)輸方式供老師選擇，1、復(fù)蘇的活細(xì)胞：采用常溫發(fā)貨的方式，收到即可觀察密度并判斷是否進(jìn)行傳代操作。優(yōu)勢(shì)是省去復(fù)蘇的步驟，細(xì)胞成活率較高。2、凍存的細(xì)胞：采用干冰運(yùn)輸，一般情況下發(fā)貨是2支凍存管，收到后放-80過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期存儲(chǔ)，擇機(jī)復(fù)蘇。優(yōu)勢(shì)是發(fā)貨快，一般一兩天即可收到，缺點(diǎn)是需要自己復(fù)蘇。

問(wèn)：為什么你們的細(xì)胞和其他公司的細(xì)胞培養(yǎng)條件不一樣？

答：我公司提供的細(xì)胞大部分都參考資源庫(kù)的培養(yǎng)信息，如ATCC、DSMZ、中科院等等官方平臺(tái)。也有少部分細(xì)胞為客戶(hù)提供了替代培養(yǎng)方案，根據(jù)客戶(hù)的意愿進(jìn)行選擇！

問(wèn)：培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液可以重復(fù)使用嗎？

答：不可以重復(fù)使用，一般從我公司發(fā)出的細(xì)胞都需要達(dá)到一定的密度后發(fā)出，充液的培養(yǎng)基血清比例會(huì)比正常培養(yǎng)時(shí)所用到的培養(yǎng)液低很多，通常在3-5%，以維持細(xì)胞存活，控制生長(zhǎng)速度，不可以用來(lái)做細(xì)胞培養(yǎng)使用。

問(wèn)：培養(yǎng)細(xì)胞在鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有一些白色的圓點(diǎn)是什么？

答：細(xì)胞在鏡下發(fā)現(xiàn)圓形的白色的點(diǎn)點(diǎn)，一般情況下是為貼壁的細(xì)胞或脫落的細(xì)胞死亡后的產(chǎn)物，懸浮細(xì)胞也會(huì)有這種現(xiàn)象，出現(xiàn)圓形的光圈一樣的圓點(diǎn)。通常，白色的圓點(diǎn)是分散分布的，聚團(tuán)類(lèi)的懸浮細(xì)胞可能會(huì)聚團(tuán)出現(xiàn)白色的亮斑，技術(shù)老師可以繼續(xù)培養(yǎng)并觀察。

問(wèn)：剛買(mǎi)回來(lái)的細(xì)胞如何凍存留種呢？

答：一般情況下，我公司建議客戶(hù)收到細(xì)胞后傳1-2代后即可安排凍存留種，可先凍存1-2支凍存管，凍存的細(xì)胞數(shù)量多一些，便于后期復(fù)蘇。購(gòu)買(mǎi)原代細(xì)胞的客戶(hù)，要充分考慮該細(xì)胞的傳代次數(shù)限制，人源原代細(xì)胞大概可以傳7代左右，鼠源的可以傳3代左右，對(duì)于一些能傳代次數(shù)很少的原代細(xì)胞，不建議凍存，收到后調(diào)整狀態(tài)后即可安排實(shí)驗(yàn)。