生長特性：懸浮生長

傳代比例：持細(xì)胞濃度在 1×10⁵~2×10⁶/ml

培養(yǎng)條件：84%IMDM，15%胎牛血清，1%雙抗，37℃，5%CO₂

凍存條件：70%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO

僅供科研使用，不可用于臨床診斷和治療

凍存細(xì)胞接收后的處理：

1）干冰運(yùn)輸，收到細(xì)胞后推薦直接復(fù)蘇 1 管，另一管放入-80 度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮，細(xì)胞直接轉(zhuǎn)入液氮暫存可能導(dǎo)致細(xì)胞復(fù)蘇率降低。

2）收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)完全揮發(fā)、凍存管瓶蓋破裂脫落,請立即拍照后與我們聯(lián)系。

注：收到凍存細(xì)胞后請先復(fù)蘇一管，如有問題請及時反饋，我們指導(dǎo)您復(fù)蘇第二管，請勿 2 管一起復(fù)蘇。

復(fù)蘇細(xì)胞接收后的處理：

1）收到細(xì)胞后，請首先檢查培養(yǎng)瓶是否破損或漏液，培養(yǎng)液是否混濁，如有漏液及培養(yǎng)液混濁情況請立即拍照把圖片發(fā)給我們。

2）在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)并拍照 100 倍和 200 倍的照片 2~3 組以及培養(yǎng)瓶外觀照留存。

3）75%酒精消毒瓶身后放培養(yǎng)箱中靜置 4-6h 后，鏡檢觀察細(xì)胞密度未達(dá)到 80-90%時，將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至 50ml 無菌離心管內(nèi)，1000rpm 離心 5min，離心后棄去上清，用新鮮完全培養(yǎng)基重懸后加入 T25 培養(yǎng)瓶或 60mm 皿中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，T25 培養(yǎng)瓶加 6-8ml 培養(yǎng)基。

4）如您收到細(xì)胞 7 天內(nèi)沒有反饋相關(guān)問題，出現(xiàn)的細(xì)胞問題將不提供免費重發(fā)服務(wù)。

注：發(fā)貨用培養(yǎng)基不可再次用來培養(yǎng)細(xì)胞

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到 80-90%時即可傳代

①收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm 離心 5min，小心棄去上清；

②加 1-2ml 新鮮完全培養(yǎng)基吹勻重懸后按照 1:2 比例加入 2 個 T25 培養(yǎng)瓶或 60mm 皿中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，T25培養(yǎng)瓶加 6-8ml 培養(yǎng)基；

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在 37℃溫水中快速搖晃融化，時間 1min 左右，加入 4-5ml 培養(yǎng)基混勻。

②在 1000RPM 左右條件下離心 4min，棄上清,加 1-2ml 新鮮完全培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入 T25 培養(yǎng)瓶或者60mm 培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，T25 培養(yǎng)瓶加 6-8ml 培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存

①收集所有細(xì)胞懸液，可細(xì)胞計數(shù)，1000rpm 離心 5min，棄上清；

②加入配制好的凍存培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，凍存液的添加量按細(xì)胞最終濃度為 1~10×10⁶/ml 添加。

③將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4 小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。