一、細胞簡介

細胞簡介

MES-SA是一種上皮細胞系，從一位56歲的白人女性子宮肉瘤患者的子宮中分離出來。該細胞系由從子宮切除術(shù)獲得的外科腫瘤標本中建立了MES-SA細胞株。這個腫瘤是低分化的子宮肉瘤。開始，細胞生長于軟瓊脂，后來轉(zhuǎn)移到多孔板。超微結(jié)構(gòu)研究和粘液素染色缺失都支持這株細胞的非表皮細胞起源。細胞對數(shù)種化療藥劑敏感，包括：鏈霉素，放線菌素D，絲裂霉素C，紫杉酚和爭光霉素。細胞對長春堿, 氮烯唑胺, 順氯氨鉑, 左旋溶肉瘤素, 長春新堿, 甲氨蝶呤和表鬼臼毒素吡喃葡糖苷有抗性。從鏈霉素存在下生長的MES-SA細胞株中篩選建立多抗藥性細胞株MES-SA/Dx5。細胞入庫凍存保種精準代數(shù)為P63代。

細胞名稱

MES-SA 人子宮肉瘤細胞

細胞別稱

MES-SA Human uterine sarcoma cells

細胞貨號

Delf-27142

來源

白人 女性 器官：子宮 疾病：子宮肉瘤

細胞形態(tài)

成纖維細胞樣

生長特性

貼壁細胞

培養(yǎng)條件

準備McCOY'S 5A培養(yǎng)基（貨號：Delf-16573）；

優(yōu)質(zhì)胎牛血清10%（貨號：Delf-11405）；

雙抗1%（貨號：Delf-15487）。

培養(yǎng)環(huán)境

氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。細胞消化時間2-3min。傳代比例1:2，傳代周期2-3天

二、細胞復蘇方法

復蘇步驟

1、將凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍；
2、加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻；
3、在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞；
4、將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)；

三、細胞傳代方法

傳代比例

1:2（具體情況視細胞生長速度及密度決定）

傳代方法

1、盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2、用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次，吸走潤洗的PBS；
3、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）；
4、將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化（1到2分鐘，難消化的細胞適當增加時間）；
5、消化到細胞大部分變圓并脫落，輕敲培養(yǎng)瓶后加入3-4ml完培終止消化；
6、混勻細胞吸出，1000rpm離心3-5min，棄上清；補加1-2ml完培吹勻；
7、按1:2分配到新的培養(yǎng)瓶中，添加6-8ml完培保持細胞生長；

注意事項

不同品牌胰酶消化時間差別較大，可根據(jù)細胞形態(tài)判斷消化進程

四、細胞凍存方法

凍存液配方

凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

凍存規(guī)格

按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

凍存方法

1、消化并離心收集細胞，計數(shù)，推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml；
2、將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管；
3、將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;

五、注意事項

注意事項

1、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2、建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

3、本產(chǎn)品僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

細胞培養(yǎng)清除試劑